猪血清IgG的纯化
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(1)透析脱盐
将上述IgG粗品溶于少量生 将上述IgG粗品溶于少量生 IgG 理盐水后装入透析袋,悬于装有 理盐水后装入透析袋, 0.01mol/L,pH7.4的PBS的大烧0.01mol/L,pH7.4的PBS的大烧 杯中,于磁力搅拌器上4℃透析 杯中,于磁力搅拌器上4℃透析 4℃ 24h, 6h换一次液。24h,每6h换一次液。 换一次液纤维素离子交换层析纯化IgG (2)DEAE-52纤维素离子交换层析纯化 ) 纤维素离子交换层析纯化取2g预处理的DEAE-52纤维素、装成1.5×30cm,柱床高 2g预处理的DEAE-52纤维素、装成1.5×30cm, 预处理的DEAE 纤维素 1.5 25cm层析柱 层析柱。 25cm层析柱。 缓冲液A(25mmol/L Tris-HCl,pH8.8, 缓冲液A(25mmol/L Tris-HCl,pH8.8,35mmol/L NaCl) 平衡。
取2mL上述透析去盐母液进层析柱,上样后先用缓冲液A 2mL上述透析去盐母液进层析柱,上样后先用缓冲液A 上述透析去盐母液进层析柱 平衡,至流出液在280nm波长洗脱曲线变得平直止。 280nm波长洗脱曲线变得平直止 平衡,至流出液在280nm波长洗脱曲线变得平直止。 以等量缓冲液A和缓冲液C(25mmol/L Tris-HCl,pH8.8, 以等量缓冲液A和缓冲液C(25mmol/L Tris-HCl,pH8.8, NaCl)连续梯度洗脱;控制流速1mL/min 连续梯度洗脱 1mL/min。 500mmol/L NaCl)连续梯度洗脱;控制流速1mL/min。
上样15min后分步收集并记录波峰,2mL/管 上样15min后分步收集并记录波峰,2mL/管,合并同一波 15min后分步收集并记录波峰 峰收集管。再用PBS溶液透析,并进行分析鉴定。 PBS溶液透析 峰收集管。再用PBS溶液透析,并进行分析鉴定。
猪血清