人腎病蛋白(nephrin) 檢測試劑盒

本試劑僅供研究使用

試驗原理：

nephrin試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知nephrin濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將nephrin物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中nephrin的活性濃度呈比例關系。

人腎病蛋白(nephrin) 檢測試劑盒試劑盒內容及其配制

自備材料

1．  蒸餾水。

2．  加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．  振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1．  避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2．  實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3．  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

人腎病蛋白(nephrin) 檢測試劑盒操作注意事項

1．  試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2．  實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

3．  不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4．  使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5．  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6．  洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7．  底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8．  加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9．  按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法

1、  血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、  血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、  細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、  保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人腎病蛋白(nephrin) 檢測試劑盒試劑的準備

1．  標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

2．  洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1．  使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2．  根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3．  加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4．  甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5．  每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6．  甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7．  每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8．  取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9．  在450nm波長處測定各孔的OD值。

性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性：不與人其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

4.局限性：6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到精確的結果。

結果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的nephrin標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的nephrin含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-400ng/ml

4、敏感度： 1.0ng/mlxyA963Hu 【中文名稱】：人Ⅲ型前膠原羧基端原肽(PⅢCP)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Procollagen III C-Terminal Propeptide (PIIICP) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyA964Hu 【中文名稱】：人Ⅱ型前膠原羧基端原肽(PⅡCP)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Procollagen II C-Terminal Propeptide (PIICP) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB629Hu 【中文名稱】：人胰島素樣生長因子2受體(IGF2R)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Insulin Like Growth Factor 2 ReHZptor (IGF2R) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB630Hu 【中文名稱】：人組織內轉化生長因子β結合蛋白2(LTBP2)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Latent Transforming Growth Factor Beta Binding Protein 2 (LTBP2) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB634Hu 【中文名稱】：人骨骼肌肌動蛋白α1(ACTα1)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Actin Alpha 1, Skeletal Muscle (ACTa1) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB635Hu 【中文名稱】：人葡萄糖轉運蛋白3(GLUT3)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Glucose Transporter 3 (GLUT3) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB637Hu 【中文名稱】：人轉化生長因子β刺激蛋白22(TSC22)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta Stimulated Protein Clone 22 (TSC22) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB640Hu 【中文名稱】：人前列腺素D合酶(PTGDS)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Prostaglandin D2 Synthase, Hematopoietic (PTGDS) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB646Hu 【中文名稱】：人黑素瘤衍生亮氨酸拉鏈額外核因子(MLZE)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Melanoma Derived Leucine Zipper Extra Nuclear Factor (MLZE) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB627Hu 【中文名稱】：人鉀氯協同轉運蛋白4(KCC4)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Potassium Chloride Cotransporters 4 (KCC4) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB649Hu 【中文名稱】：人鉀氯協同轉運蛋白2(KCC2)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Potassium Chloride Cotransporters 2 (KCC2) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB628Hu 【中文名稱】：人鉀氯協同轉運蛋白3(KCC3)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Potassium Chloride Cotransporters 3 (KCC3) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB647Hu 【中文名稱】：人趨化因子C-C-基元受體7(CCR7)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Chemokine C-C-Motif ReHZptor 7 (CCR7) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyB653Hu 【中文名稱】：人肌肉生長抑制素(MSTN)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for Myostatin (MSTN) 【靈敏度】：9.375pg/mL
xyA970Hu 【中文名稱】：人乙酰輔酶A(A-CoA)ELISA試劑盒 【英文名稱】：ELISA Kit for AHZtyl Coenzyme A (A-CoA) 【靈敏度】：9.375pg/mL