Sepharose  6FF    瓊脂糖凝膠 6FF

品   牌：solarbio

中文名稱：瓊脂糖凝膠CL-6B

英文名稱：Sepharose CL-6B

貨    號：S9190

供應(yīng)商：北京索萊寶科技有限公司

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Sepharose  6FF   瓊脂糖凝膠 6FF

瓊脂糖凝膠6FF說明書

瓊脂糖凝膠6FF是在瓊脂糖凝膠6B的基礎(chǔ)上經(jīng)過兩次交聯(lián)形成的高交聯(lián)基質(zhì)，微球的化學(xué)穩(wěn)定性及物理性能顯著增強(qiáng)，剛性增加，流速更快，使產(chǎn)品處理時(shí)間大大縮短。可用于生物大分子的凝膠層析。

1 外觀

Sepharose  6FF    瓊脂糖凝膠 6FF 為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。

2 理化指標(biāo)

    *檢測條件： 層析柱10mm×300mm  *柱床高15cm,25℃, 流動(dòng)相為0.1mol/LNaCl

3 包裝

Sepharose  6FF    瓊脂糖凝膠 6FF 以聚胺酯瓶密封包裝，外貼標(biāo)簽，注明“品名、體積、顆粒大小” 等內(nèi)容。

4. 貯存

Sepharose  6FF    瓊脂糖凝膠 6FF 應(yīng)密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20% 乙醇），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

5 注意事項(xiàng)

Sepharose  6FF    瓊脂糖凝膠 6FF 應(yīng)避免與氧化劑接觸，避免長時(shí)間暴露在空氣中。

6 運(yùn)輸

運(yùn)輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。

7 保質(zhì)期

5年。

8 應(yīng)用

Sepharose  6FF    瓊脂糖凝膠 6FF 具有很高的化學(xué)穩(wěn)定性、高流速、較好的機(jī)械性能、可多次重復(fù)使用等特點(diǎn)，非特異性吸附低，回收率高，可用有機(jī)溶劑及1~2mol/L 的NaOH在位清洗，適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的凝膠色譜純化。

下面簡要介紹介質(zhì)的使用過程。

8.1 裝柱

凝膠過濾介質(zhì)的使用對裝柱的要求較高，為了保證分離效果，一般通過柱子上加一個(gè)裝柱器來使分離柱裝滿凝膠，或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進(jìn)行檢驗(yàn)。

以下過程為通用介質(zhì)裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子，可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊，接好管路。

（1）讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。

（2）選擇一根一定直徑的柱子，長約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠（約為柱床體積的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。

（3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無氣泡。

（4）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

（5）打開蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用緩沖液平衡柱子，到柱床穩(wěn)定。

（6）好用一個(gè)裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平，上好柱頭。

8.2 平衡

讓緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。

8.3 上樣

（1）樣品用緩沖液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理，再上樣。

（2）介質(zhì)對樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的，分子量大的先流出來。

（3）上樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離越好。

8.4 洗脫

用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

8.5 再生

一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。

8.6 注意

在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，始終要避免柱子流干氣泡進(jìn)入。

若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

8.7 在位清洗

（1）對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

（2）對沉淀蛋白、對以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1M NaOH 去除。

（3）對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。

8.8 注意

在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干氣泡進(jìn)入。

8.9 去熱源

用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)。或用以下方法步驟去除：

（1）2倍柱體積的70%乙醇；

（2）2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5；

（3）1倍柱體積4M尿素；

（4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl；

以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

8.10 消毒

用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。