外包服務(wù) 原位雜交

一原位雜交.項(xiàng)目介紹：

1. 原位雜交原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

2. 所需器材：

脫水機(jī)G-JT12s，包埋.機(jī)G-L5/p5,病理切片機(jī)RM2016，凍臺(tái)G-P1，烤箱GFL-70/230,組織攤片機(jī)G-KDP，載玻片及蓋玻片，正置熒光顯微鏡，成像系統(tǒng)，恒溫箱，高壓滅菌鍋，移液槍，鐘擺搖床。

3. 主要試劑：DEPC。原位雜交固定液。PBS緩沖液。20×SSC洗脫液。蛋白酶K。DAPI。抗熒光淬滅封片劑。雜交液。

 二.石蠟切片熒光探針原位雜交實(shí)驗(yàn)步驟

1、組織固定：組織取出洗凈后立即放入固定液（DEPC水配制）中固定2-12h。

2、脫水：組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟，包埋。

3、切片：石蠟經(jīng)切片機(jī)切片，攤片機(jī)撈片，62°烤箱烤片2h。

4、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲本Ⅰ15min-二甲本Ⅱ15min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。

5、消化：根據(jù)組織固定時(shí)間長(zhǎng)短，切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘，自然冷卻。后基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化    min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。

6、預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液，37°C孵育1h。

7、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針     雜交液, 濃度    ，恒溫箱     度雜交過夜。

8、雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌。

9、DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。

10.鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm，發(fā)射波長(zhǎng)420nm,發(fā)藍(lán)光；FAM(488)綠光激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm，發(fā)射波長(zhǎng)515-555 nm，發(fā)綠光；CY3紅光激發(fā)波長(zhǎng)510-560，發(fā)射波長(zhǎng)590nm，發(fā)紅光。）DAPI染核，為藍(lán)光。

外包服務(wù) 原位雜交

注意事項(xiàng)：

1.mRNA為檢測(cè)對(duì)象時(shí)，需嚴(yán)格要求實(shí)驗(yàn)環(huán)境經(jīng)無(wú)RNA酶處理。

2.FISH切片保存時(shí)間較短，應(yīng)盡快取圖。

茁彩生物（zcibio）專注于各種生物制劑、標(biāo)準(zhǔn)品、API及化合物庫(kù)，總部位于中國(guó)上海，分別在國(guó)內(nèi)各個(gè)省份設(shè)置代理商。Zcibio經(jīng)過不斷努力已經(jīng)研究出更多產(chǎn)品，包括旗下的流式抗體，分子生物學(xué)試劑，以及WB輔助試劑， 產(chǎn)品涵蓋癌癥、神經(jīng)科學(xué)、抗感染、表觀遺傳學(xué)等20個(gè)熱門研究領(lǐng)域。同時(shí)zcibio還擴(kuò)大了市場(chǎng)的外包服務(wù)，其中包括常用的HE然后，病例切片，免疫組化以及TUNEL檢測(cè)，項(xiàng)目超過20種不同類型的試驗(yàn)，可滿足實(shí)驗(yàn)室絕大多數(shù)的項(xiàng)目要求。zcibio 對(duì)每批產(chǎn)品都進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，