正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

商品屬性：

測定意義：

α-L-Af 是一種能夠水解非還原呋喃阿拉伯糖殘基的糖苷酶類，使細胞壁阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖等中性糖不斷解離，促進果膠的增溶和降解。由于果實成熟過程中常常伴隨著阿拉伯糖的喪失，該酶活性在果實成熟軟化中的研究具有重大意義。
測定原理：
α-L-Af分解對硝基酚阿拉伯呋喃糖苷生成對-硝基苯，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算α-L-Af活性。
自備用品：
酶標儀/可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 2.5mL 蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑

仍-20℃保存。

試劑二：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 13mL×1 瓶，4℃保存。

組織樣本的前處理：

1、細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量

（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 400nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定（在 EP 管或 96 孔板中依次加入下列試劑）：

試劑名稱（μL） 測定管 對照管

試劑一 25

蒸餾水 25

試劑二 35 35

樣本 10 10

迅速混勻，放入 37℃保溫 30min

試劑三 130 130

充分混勻， 400nm 處測定吸光值 A，計算 ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管需設一個對照管。

α-L-Af 活性計算：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為 y =0.00585x -0.0027；x 為標準品濃度（nmol/mL），y 為吸光值。

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每 min 產生 1nmol 對-硝基苯定義為一個酶活性單位。

α-L-Af 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=39.89×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織每小時產生 1nmol 對-硝基苯定義為一個酶活性單位。

α-L-Af 活性(nmol/min/g 鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=39.89×(ΔA+0.0027) ÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每小時產生 1nmol 對-硝基苯定義為一個酶活性單位。

α-L-Af 活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=0.08×(ΔA +0.0027)

Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；V 反總：反應體系總體積，0.07mL；V 樣：加入反應體系

中樣本體積，0.01mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或

細菌總數，500 萬；T：反應時間，30min。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0039x -0.0027；x 為標準品濃度（nmol/mL），y 為吸光值。

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每小時產生 1nmol 對-硝基苯定義為一個酶活性單位。

α-L-Af 活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=59.83×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每 g 組織每小時產生 1nmol 對-硝基苯定義為一個酶活性單位。

α-L-Af 活性(nmol/min/g 鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=59.83×(ΔA+0.0027) ÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每小時產生 1nmol 對-硝基苯定義為一個酶活性單位。

α-L-Af 活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.12×(ΔA +0.0027)

Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；V 反總：反應體系總體積，0.07mL；V 樣：加入反應體系

中樣本體積，0.01mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質量，g； 500：細胞或

細菌總數，500 萬；T：反應時間，30min。

生化檢測試劑盒實驗操作說明：

一、抗氧化系列生化檢測試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測、總抗氧化能力（TAC）檢測、植物原花青素(OPC)含量檢測、植物類黃酮含量檢測、植物總酚（TP）含量檢測試劑盒。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例，提供了一種簡單易用的比色分析法，用于測定各種樣品中的XO活性，特點是測定血清，血漿，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性，以及廣泛的檢測范圍：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化檢測試劑盒

包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過氧化氫（H2O2）檢測、脂質過氧化(丙二醛) 分析、蛋白質羰基含量檢測、超氧陰離子含量檢測等試劑盒。

蛋白質羰基含量檢測試劑盒（比色法）為例，提供了一種簡單易用的比色法，用于分析不同生物樣品（細胞/組織裂解液，生物液體）中蛋白質羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。

特點是：1.測定組織樣本、細胞、細菌、血清等中的蛋白質羰基含量。2.樣本處理、實驗步驟以及結果計算更加詳盡準確精煉。3.保質期長。

三、抗逆系列生化檢測試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性檢測、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例，提供一種簡單易用的比色測定法，用于定量測定血清，血漿，組織/細胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點是：1.測定血清，血漿，組織/細胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過WST-8法測定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測范圍：3.13- 200U/mL。

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