3磷酸甘油酸激酶(PGK)測試盒微量法
參考價(jià) | ¥4560.00 |
- 公司名稱 上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
- 品牌其他品牌
- 型號
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間2024/9/30 10:07:25
- 訪問次數(shù) 242
100管/96樣 | 4560.00元 | 15 盒可售 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣 |
---|---|---|---|
貨號 | GOY-SH102 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) | 檢測方法 | 微量法 |
產(chǎn)品類別 | 糖酵解系列 | 品牌 | 谷研 |
貨期 | 現(xiàn)貨 |
本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn),不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用!
商品屬性:
貨號 | GOY-SH102 | 檢測方法 | 微量法 |
規(guī)格 | 100管/96樣 | 產(chǎn)品類別 | 糖酵解系列 |
測定意義:
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關(guān)鍵酶,廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi),催化 1,3-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)?3-磷酸甘油酸,產(chǎn)生 1 分子 ATP,具有影響 DNA 復(fù)制和修補(bǔ)及刺激病毒 RNA合成等生物學(xué)功能,廣泛應(yīng)用于藥物靶標(biāo)設(shè)計(jì)。
測定原理
3-磷酸甘油酸激酶催化 3-磷酸甘油酸和 ATP 產(chǎn)生 1,3-二磷酸甘油酸和 ADP,1,3-二磷酸甘油酸在 3-磷酸甘油醛脫氫酶和 NADH 作用下產(chǎn)生 3-磷酸甘油醛、NAD 和磷酸,340nm 處的吸光度變化反映了 3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板。
試劑組成和配制
提取液:液體 100mL×2 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑三:粉劑×1 支,-20℃避光保存。臨用前加 1mL 蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑四:粉劑×1 支,-20℃避光保存。臨用前加 1 mL 蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑五:粉劑×1 瓶,-20℃避光保存。臨用前加 4 mL 蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。 酶液提取
①總 PGK 酶提取:建議稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時(shí)間 1min),然后 4℃,500g 離心 5min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體 PGK 酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 提取液),冰浴勻漿后于 4℃,500g 離心 5min,棄沉淀,取上清在 4℃,8000g 離心 10min,取上清用于測定胞漿 PGK 酶活性,取沉淀加 1mL
提取液,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎 3s,間歇 7s,總時(shí)間 1min),然后 4℃,500g 離心 5min,取上清測定葉綠體中 PGK 酶活性。
建議測定總 PGK 酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的 PGK,則按照步驟②提取粗酶液。
測定步驟:
1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長至 340nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 100μL 試劑一,20μL 試劑二,10μL 試劑三,10μL 試劑四,40μL 試劑五,20μL 粗酶液,充分混勻,記錄 340nm 處 10s 的吸光值 A1 和 310s 的吸光值 A2,△A=A1-A2
計(jì)算公式
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
(1)按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
PGK(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義:每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
PGK(nmol/min /g 鮮重)=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W
V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×10
3 L / mol /cm;d:比
色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.02mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;T:反
應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
b. 用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下
(1)按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
PGK(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義:每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。
PGK(nmol/min /g 鮮重)=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W
V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;ε:NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×10
3 L / mol /cm;d:比
色皿光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0.02mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;T:反
應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
生化試劑盒的使用注意事項(xiàng):
選擇合適的試劑盒:根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測對象選擇合適的試劑盒,確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。
嚴(yán)格遵循說明書:按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作,避免誤用或浪費(fèi)。
注意保存條件:按照試劑盒的保存條件進(jìn)行妥善保存,避免陽光直射、高溫或潮濕等不利因素。
控制實(shí)驗(yàn)條件:在實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件,如溫度、時(shí)間、pH值等,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。
公司正在出售的產(chǎn)品:
乙醇酸氧化酶測試盒 | H2S含量測試盒 |
3磷酸甘油酸激酶(PGK)測試盒 | Na+k+ ——ATP酶測試盒 |
BCA蛋白法含量測試盒 | NADH氧化酶(NOX)測試盒 |
Ca++Mg++ ——ATP酶測試盒 | NADP磷酸酶(NADPase)測試盒 |
6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒 | NADP蘋果酸酶(NADPME)測試盒 |
ADPG焦磷酸化酶(AGP)測試盒 | 抗淋巴細(xì)胞毒抗體檢測試劑盒 ALA/LCA ELISA Kit |
ADP含量測試盒 | 人1,25-二羥基3ELISA試劑盒 |
AMP含量測試盒 | 人1,4,5-三磷SUAN肌醇ELISA試劑盒 |
3磷酸甘油酸激酶(PGK)測試盒 | 人11去氫血栓烷B2ELISA試劑盒 |
6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒 | 人15脂加氧ELISA試劑盒 |
ADPG焦磷酸化酶(AGP)測試盒 | 人17羥孕酮ELISA試劑盒 |
ADP含量測試盒 | 人2,3-二磷SUAN甘油SUANELISA試劑盒 |
AMP含量測試盒 | 3磷酸甘油酸激酶(PGK)測試盒微量法人25羥基3ELISA試劑盒 |
ATP含量測試盒 | 人3-硝基酪氨SUANELISA試劑盒 |
ATP檸檬酸裂解酶(ACL)測試盒 | 人3型1-磷SUAN鞘氨醇受體ELISA試劑盒 |
訂購流程:
1、訂購前,請與銷售員核對產(chǎn)品中文名稱/CAS號/英文名稱等。
2、我司大部分產(chǎn)品都是現(xiàn)貨,產(chǎn)品核實(shí)好下單后即可當(dāng)天發(fā)貨。(庫存信息以當(dāng)日為準(zhǔn))如有特殊要求請?jiān)诎l(fā)貨前與銷售員聯(lián)系。
3、我司產(chǎn)品支持款到發(fā)貨、快遞代收尾款、網(wǎng)上現(xiàn)拍等付款方式。
4、質(zhì)量保證,嚴(yán)格把關(guān),如有產(chǎn)品異議經(jīng)公司鑒定確認(rèn)后可包換包退,免除客戶后顧之憂。
5、我司提供完善的售后服務(wù),使用過程中如有任何疑問,可提供技術(shù)指導(dǎo)。
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