免疫組化試劑盒使用說明書        

（通用型）

工作原理

SABC（Strept Avidin-Biotin Complex）是專為免疫組化等免疫反應(yīng)而設(shè)計(jì)的，用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì)，分子量47000。同親和素一樣，對生物素分子有*的親和力。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性,IP=6.0-6.5，對組織和細(xì)胞的非特異吸附很低，因而基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景往往很低。根據(jù)研究，SABC 大約可形成一百個(gè)左右的過氧化物酶和五十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。先用生物素標(biāo)記的二抗特異性的結(jié)合一抗，然后通過二抗聚合大量的鏈酶親和素—過氧化物酶復(fù)合物，形成鏈霉素親霉素酶復(fù)合體（SABC）。這樣也保證了SABC 具有很高的敏感性。SABC 兼具高敏感性，低背景和操作簡便的優(yōu)點(diǎn)。

辣根過氧化物酶（HRP）由于在辣根中的含量很高，故命名。它的分子量在40000左右，在過氧化氫存在時(shí)能催化苯酚、苯胺等聚合，它不會(huì)遮蓋抗原的結(jié)合部位，具有較高活性及特異性，生成的產(chǎn)物不易擴(kuò)散，可作用于多種底物，產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強(qiáng)，易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。DAB在 H₂O₂存在的情況下，可以作為HRP的電子供體，產(chǎn)生褐色的不溶顆粒，可作為顯色的試劑。

試劑盒組成（*切片數(shù)50～100pcs）

操作步驟

1.      切片防脫片劑處理:可選擇APES 或Poly-Lysine。撈片后置烤箱58-60 ℃30-60 分以，使切片緊密粘附。

2.      防脫片劑處理后的切片在二甲苯中脫蠟，然后逐級降濃度酒精入水，每次3-5 分鐘；

*I（變?yōu)椴煌该鳎?span lang="EN-US">                 1－2分鐘
*II                              1－2分鐘
95% 酒精                                1－2分鐘
80% 酒精                                1－2分鐘   
自來水洗                                 片刻   

3.      0.01mol/L pH7.4 PBS洗滌3次，每次5 分鐘 ；

4.      3% H ₂ O ₂ 室溫孵育 5-10 分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次，每次5 分鐘；

5.      0.01mol/L pH6.0檸檬酸緩沖液復(fù)性20分鐘，冷卻至室溫。0.01 mol/L  pH7.4的PBS洗滌3次，每次5 分鐘 ；

6.      加封閉液（5%BSA）50ul/片，于濕盒中室溫感作30分鐘，然后甩去多余的封閉液，不洗滌；

7.      滴加一抗到切片上37℃孵育1小時(shí)左右或者4℃過夜， 然后0.01 mol/LpH7.4的PBS洗滌3次，每次5 分鐘 ；

8.      滴加二抗，覆蓋切片，置濕盒中37℃感作30分鐘左右（以錫紙避光即可），取出后洗滌（方法同4）。

9.      DAB顯色；

10.  蘇木素輕度復(fù)染。脫水，透明，封片。顯微鏡觀察。

保存方法   2-8℃保存，注意避免冷凍。

有 效 期   一年                                 

生產(chǎn)日期   見封口