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技術文章

新型冠狀病毒PCR實驗室解決方案

點擊次數:5950 發布時間:2020-2-6

自新型冠狀病毒發現以來,特別是PCR實驗室新型冠狀病毒核酸檢測工作任務艱巨。先介紹一下PCR檢測的流程:

1試劑制備區

功能:主要是作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備,試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區,不得經過其它區域。試劑原材料需貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。所需要的儀器設備:

天平(用于精確稱量各類試劑)超凈工作臺(涉及對細菌的操作均需在超凈工作臺下完成)移液器(準確量取特定體積溶液20-100ul)純水(超純水18.2ΩM.CM)藥品冷藏箱短期保存  )→試劑低溫冰箱可選2-8°、-20℃)→混勻儀(移取樣本前需要混勻)(推薦艾本森品牌:MixMax漩渦混勻儀)消毒車(空間環境消毒)滅菌鍋(實驗室物品、試劑、培養基消毒滅菌)PH(配置試劑是精確測量PH值)  

2 樣本制備區

功能:臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時DNA的合成。所需要的儀器設備

生物安全柜(為了防止有害懸浮微粒、氣溶膠的擴散)樣本低溫冰箱(-20℃,-80℃保存樣本及DNA)高速臺式冷凍離心機(用于收集微生物菌體、細胞碎片以及其他沉淀物,有些樣品由于在常溫下不太穩定,需要低溫環境)恒溫金屬浴(用于DNA雜交過程中水浴控溫)(HtPot40恒溫金屬浴)移液器(準確量取特定體積溶液)紫外燈或者消毒車(空間環境消毒)勻儀(移取樣本前需要混勻)(推薦艾本森品牌:MixMax漩渦混勻儀)超凈工作臺(涉及對細菌的操作均需在超凈工作臺下完成)低溫搖床(用于大腸桿菌和酵母菌的振蕩培養)磁力攪拌器(加速溶解固體內容物 )

3核酸擴增區

功能:主要是DNA擴增,已制備的DNA模板和合成的DNA和主反應混合液,制備成反應混合液等,也可以在本區域內進行。在PCR測定中,通常在擴增后須打開反應管。

基因擴增儀   (基因檢測DNA/RNA擴增)熒光定量PCR儀(核酸定量分析)核酸提取儀(樣品DNA/RNA提取)移液器(準確量取特定體積溶液)紫外燈或者消毒車   (空間環境消毒)超凈工作臺(涉及對細菌的操作均需在超凈工作臺下完成   )純水裝置(用于PCR,DNA測序需要超純水)

4產物分析區

功能:主要進行的操作為擴增片段的測定,如使用全自動封閉分析儀器檢測,需要儀器設備:

基因擴增儀  (基因檢測DNA/RNA擴增)熒光定量PCR儀(核酸定量分析)核酸提取儀(樣品DNA/RNA提取)移液器(準確量取特定體積溶液)紫外燈或者消毒車 (空間環境消毒)超凈工作臺(涉及對細菌的操作均需在超凈工作臺下完成   )純水裝置(用于PCR,DNA測序需要超純水

電泳儀(水平電泳用于核酸DNA/RNA檢測,垂直電泳用于蛋白檢測,轉印電泳用于將蛋白轉印到膜上做western檢測)凝膠成像系統/紫外檢測儀(用于核酸瓊脂電泳和蛋白聚丙酰胺的觀察和拍照,紫外分析儀用于染色后核酸瓊脂電泳膠觀察,不能連接電腦)電爐(電泳瓊脂凝膠加熱融化)

 

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