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制備型液相色譜儀分離和純化優化方法介紹

閱讀:2729      發布時間:2018-9-6
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     廣州艾欣科學儀器有限公司為您提供全面的制備型液相色譜儀分離/純化優化方法,制備色譜柱的選擇方法等。
  一、制備型液相色譜儀的選擇方法
  1、分離模式的選擇(在樣品可能分離的條件下使用分析色譜柱進行測試)
  如果樣品有多種可分離的模式,請在選擇上考慮以下幾點
  1)分離的效率:分離能力、樣品上樣量、制備時間;
  2)經濟性:填料、流動相的成本、單位時間的處理量;
  3)其他:安全性、目標成分的變性、系統的簡易性。
  2、制備規模的選擇
  根據樣品的處理量選擇制備柱的內徑以及填料的粒徑。表1列舉了選擇制備柱內徑和填料粒徑的基本標準。
  選擇制備柱內徑和填料粒徑的基本標準
  1)制備柱內徑
  樣品的上樣量與制備柱的橫截面積是成正比的,所以必須要選擇適合樣品上樣量的制備柱內徑。
  2)填料的粒徑
  填料的粒徑越小制備柱的柱效越高,同時填料的價格也越高。另外由于柱壓也會變高,因此對所使用設備的耐壓性要求也會相應的提高。
  在目標成分與相近的峰分離不充分等情況下,可選擇使用粒徑小的填料來提高分離效果。反之,粒徑越大制備柱的柱效就越低,當然填料的價格也更便宜,柱壓也會隨之降低。
  3)制備柱的長度
  柱長越長分離能力就越高,樣品的上樣量也會增加。但由于柱長和柱壓成正比,因此柱子越長柱壓也就越高。
  二、制備條件的優化
  根據使用的粒徑確定制備條件
  使用已確定粒徑大小的填料對樣品的分離進行測試。測試時使用分析色譜柱,并對制備條件進行優化
  為了能更有效地進行制備條件的摸索,我們推薦使用YMC-Pack R&D系列色譜柱。
  1、洗脫條件的優化
  制備不同于分析,首先要考慮的是更有效地得到更高純度的目標成分和高收率。進行制備的關鍵點是在考慮必須分離的物質和其余物質的基礎上來設定洗脫條件。
  由于制備所用的填料粒徑比分析用的填料粒徑大,因此柱效會有所降低,可能得不到一些必要的分離。在這種情況下,通過調整洗脫條件及降低線流速可改善分離。
  即使這樣分離仍然不充分的話,可嘗試改變柱長和填料粒徑。
  2、上樣量的摸索
  分階段增加上樣量,從而求得能得到目標純度的大上樣量。然后根據大上樣量來計算放大到制備色譜柱的上樣量。
  3、制備型液相色譜儀的合理性確認
  實際進行制備時首先需確認流速和柱壓等是否適合設備的性能。如果要在制備柱上取得和分析測試時一樣的分離效果,線流速必須要與分析測試時柱的數值保持一致,制備柱的流速可通過按測試用柱的流速的橫切面積的正比來設定,從而獲得相同的線流速。
  如果線流速是一致的,那制備柱的壓力和測試用柱的壓力也是相同的。
  如果柱壓超過設備的耐壓限度,必須改變流速、柱長等條件。并且管線等也需要更改為適合流速的尺寸。

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