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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5965-100T/96S6-磷酸葡萄糖(P6G)含量檢測試劑盒 微量法

6-磷酸葡萄糖(P6G)含量檢測試劑盒 微量法
  • 6-磷酸葡萄糖(P6G)含量檢測試劑盒 微量法
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC5965-100T/96S
  • 廠商性質 生產商
  • 產品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-07-29 14:18:06瀏覽次數:3832評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現貨 規格 100T/96S
貨號 BC5965 應用領域 環保,化工,生物產業,農業,綜合
主要用途 6-磷酸葡萄糖(P6G)含量檢測
有效期
6個月
儲存條件
-20℃
中文名稱
6-磷酸葡萄糖(P6G)含量檢測試劑盒 微量法
單位

英文名稱
Glucose-6-Phosphate(P6G)Content Assay Kit
檢測方法
微量法
規格
100T/96S

動物組織6-磷酸葡萄糖(G6P)含量檢測試劑盒說明書

微量法

貨號:BC5965

規格:100T/96S

產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規格

保存條件

提取

液體110mL×1

2-8℃保存

試劑一A

粉劑×1

2-8℃保存

試劑一B

液體25mL×1

2-8℃保存

試劑二

粉劑×1

2-8℃保存

試劑三

粉劑×1

-20℃保存

標準品

粉劑×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 試劑一:臨用前將試劑一A全部溶于試劑一B,充分溶解后使用,未用完的試劑2-8℃保存4(試劑顏色由透明變至淡黃色為正?,F象,可正常使用),禁止放-20℃保存。

2、 試劑二:臨用前加入0.5mL蒸餾水充分溶解,未用完的試劑-20℃分裝保存4,避免反復凍融

3、 試劑三:臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解,未用完的試劑-20℃分裝保存4,避免反復凍融(該試劑為凍干試劑,可能存在肉眼觀察不同瓶內試劑量相差較大甚至量很少的現象,此現象不影響使用,實際質量相同。

4、 試劑三工作液:臨用前根據樣本量按試劑三:蒸餾水=3μL12μL(共15μL,約4T)的比例配制后使用,現配現用。

5、 標準品:臨用前加入1.645mL蒸餾水充分溶解成20μmol/mL 6-磷酸葡萄糖標準品,2-8℃保存4周。

6、 0.5μmol/mL標準品配制:取25μL 20μmol/mL 6-磷酸葡萄糖標準品,加975μL蒸餾水充分溶解成0.5μmol/mL 標準品進行測定,現配現用。

7、 工作液:臨用前根據樣本量按試劑一:試劑二:試劑三工作液=870μL15μL15μL(共900μL,約4T)配成工作液后使用,現配現用。

產品說明:

6-磷酸葡萄糖(Glucose-6-PhosphateG6P),又稱葡萄糖-6-磷酸,是糖酵解和磷酸戊糖途徑的中間產物,廣泛存在于動植物體和微生物中。在糖酵解的第一步反應中,葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸,然后通過磷酸葡萄糖異構酶的催化形成果糖-6-磷酸,以繼續糖酵解的其它步驟;而在戊糖磷酸途徑中,葡萄糖-6-磷酸是其第一個底物,該過程也是生成NADPH的主要途徑。此外,葡萄糖-6-磷酸也能轉化形成糖原或淀粉而被儲存起來。

6-磷酸葡萄糖脫氫酶可催化G-6-PNADP+生成6磷酸葡萄糖酸和NADPH,在340nm處有吸收峰,據此可以計算6-磷酸葡萄糖的含量。

注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96UV板、天平、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、 樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻

組織:按照質量(g):提取液體積mL15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于沸水浴煮5min(用封口膜封口,防止爆蓋,冷卻至室溫后于4℃ 12000g離心10min,取上清置冰上待測。

二、測定步驟

1、 紫外分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調節波長至340nm,分光光度計用蒸餾水調零。

2、 工作液37℃預熱5min。

3、 樣本測定(在96UV/微量石英比色皿中加入下列試劑)

試劑名稱(μL

測定管

標準管

空白管

樣本

75

-

-

標準品

-

75

-

蒸餾水

-

-

75

工作液

225

225

225

充分混勻,立即測定340nm10s時的吸光度A1,然后迅速置于37℃反應10min,測定10min10s時的吸光度A2,分別記為A1測定、A2測定、A1標準、A2標準、A1空白、A2空白。計算ΔA標準=A2標準-A1標準)-A2空白-A1空白),ΔA測定=A2測定-A1測定)-A2空白-A1空白)。標準管和空白管只需測1-2次。

三、6-磷酸葡萄糖含量計算公式

1. 按樣本蛋白濃度計算:

G6P含量μmol/g prot=ΔA測定÷ΔA標準÷C標準×V提取÷Cpr×V提取×F

=0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr×F

2. 按樣本質量計算:

G6P含量μmol/g 質量)=ΔA測定÷ΔA標準÷C標準)×V提取÷W×F

=0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F

C標準:標準點濃度,0.5μmol/mL;V提?。杭尤胩崛∫旱捏w積,1mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;F:稀釋倍數。

注意事項:

1. 最好兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結果的準確性。

2. 若樣本ΔA<0.01,可適當增大樣本量后測定;若樣本ΔA>1.0A測定>1.5,可用蒸餾水稀釋上清液后測定,

注意同步修改計算公式中的稀釋倍數。

實驗實例:

 

1、 0.102g大鼠肝臟加入提取液進行冰浴勻漿,取上清后按照測定步驟操作,用96UV板測得ΔA測定=A2測定-A1測定)-A2空白-A1空白)=0.281-0.177-0.045-0.045=0.104,ΔA標準=A2標準-A1標準)-A2空白-A1空白)=0.470-0.074-0.045-0.045=0.396,按樣本質量計算6-磷酸葡萄糖含量得:

G6P含量μmol/g 質量)=0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =1.287 μmol/g 質量。

2、 0.103g大鼠肺加入提取液進行冰浴勻漿,取上清后按照測定步驟操作,用96UV板測得ΔA測定=A2測定-A1測定)-A2空白-A1空白)=0.179-0.113-0.045-0.045=0.066,ΔA標準=A2標準-A1標準)-A2空白-A1空白)=0.470-0.074-0.045-0.045=0.396,按樣本質量計算6-磷酸葡萄糖含量得:

G6P含量μmol/g 質量)=0.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =0.809 μmol/g 質量。

參考文獻:

[1] Belford J, Feinleib M R .The increase in glucose-6-phosphate content of the heart after the administration of inotropic catecholamines, calcium, and aminophylline[J].Biochemical Pharmacology, 1962, 11(11):987-994.

[2] Ashcroft S , Capito K , Hedeskov C .Time course studies of glucose-induced changes in glucose-6-phosphate and fructose-1, 6-diphosphate content of mouse and rat pancreatic islets[J].Diabetologia, 1973, 9(4):299-302.

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