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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T |
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貨號 | SEKR-0002 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 大鼠IL-1 β含量測定 |
大鼠白細胞介素1β( IL-1 β)ELISA試劑盒
注意事項:
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復溶但未用完的標準品,請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測,且加入試劑的順序應(yīng)保持*。
5. 為避免交叉污染,請在試驗中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜(※)及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準確,每次檢測均需做標準曲線。
安全提示:
試劑盒中的終止液為酸性溶液,操作人員在使用時請帶上手套并注意防護;在操作過程中也要避免試
劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,請用大量清水清洗;檢測血液樣本及其它體液樣本時,請按國家生物
實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。
自備實驗器材(不提供,可代購)
1. 酶標儀(主波長 450nm,參考波長 630nm)
2. 高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3. 洗板機或洗瓶
4. 37℃孵育箱
5. 雙蒸水,去離子水,量筒等
6. 稀釋用聚丙烯試管
大鼠白細胞介素1β( IL-1 β)ELISA試劑盒
樣本收集及儲存:
1. 細胞培養(yǎng)上清:
將細胞培養(yǎng)基移無菌離心管,在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復凍融。
2. 血清樣本:
室溫血液自然凝固 20 min 后,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),保存過程中如有沉淀,請再次離心,避免反復凍融。
3. 血漿樣本:
將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據(jù)標本的實際要求選擇 EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合 20 min ,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復凍融。
※注意:
血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結(jié)果;如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的值,請將樣品做適當倍數(shù)稀釋后檢測,建議正式實驗前做預實驗以確定稀釋倍數(shù)。
試劑準備:
1. 試劑回溫:首先在實驗前 30 min 將試劑盒,待測樣本放置于室溫下,濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,請放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。
2. 配制洗滌液:預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應(yīng)用液,未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。
3. 標準品梯度稀釋:加入標準品/樣本稀釋液(SR1)1ml凍干標準品中,靜置15分鐘待 其*溶解后輕輕混勻(濃度為1000pg/ml),然后按照以下濃度:1000、500、 250、125、 62.5、31.25、15.625、 0 pg/ml進行稀釋。復溶過的標準品原液(1000pg/ml)未用完的 應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,并將其貯存在-20~-80℃冰箱,具體如下圖。
4. 生物素化抗體工作液:預先計算好試驗所需用量,用檢測稀釋液(SR2)將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應(yīng)用工作液(稀釋前充分混勻),請在30分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中。
5. 酶結(jié)合物工作液:按每次試驗所需用量配制,用酶結(jié)合物稀釋液(SR3)將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1 倍應(yīng)用工作液(稀釋前離心),請在30分鐘內(nèi)使用。
6. 洗滌方法:
自動洗板:甩盡酶標板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,注入洗滌液為 300ul/孔,注 與吸出間隔為 30 秒,洗板 5 次。
手工洗板:甩盡酶標板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,靜止 30 秒后甩 凈酶標板孔中液體,在厚迭的吸水紙上拍干,洗板 5 次。
白細胞介素1β
結(jié)果判斷:
1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測,參考波長為 630 nm。如不能進行雙波長檢測,請 用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值。
2.計算標準品、樣品的平均 OD 值:每個標準品和標本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值
3.以標準品濃度為橫坐標,吸光度OD值為縱坐標,用軟件繪制標準曲線,樣品中IL-1β含量可通過對應(yīng)OD 值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。
4.若標本 OD 值高于標準曲線上限,應(yīng)做適當稀釋后重新檢測,計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。
參數(shù)表征:
1. 數(shù)據(jù)及標準曲線
本圖僅供參考,應(yīng)以當次試驗標準品繪制的標準曲線計算大鼠 IL-1β 的樣本含量
2. 靈敏度:
低可檢測大鼠 IL-1β 濃度達7pg/ml,
20 個零標準品濃度 OD 的平均值加上兩個標準差,計算相應(yīng)的可檢測濃度。
3. 特異性:
不與大鼠 GDNF、 IFN-γ、 IL-1α、 IL-2、 IL-4、 β-NGF、 TNF-α 等反應(yīng),人 IL-1 RI、 IL-1 RII 等反應(yīng)
4. 重復性:
板內(nèi),板間變異系數(shù)<10%。
5. 回收率:
在選取的健康大鼠血漿、細胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的大鼠 IL-1β,計算回收率。
6. 線性稀釋:
分別在選取的 4 份健康大鼠血漿和細胞培養(yǎng)上清中加入高濃度大鼠 IL-1β,在標準曲線動力學范圍內(nèi)進行稀 釋,評估線性。
IL-1β酶聯(lián)免疫試劑盒