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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>細(xì)胞相關(guān)產(chǎn)品>>細(xì)胞分離液>> P5230小鼠外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒

小鼠外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒
  • 小鼠外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號(hào) P5230
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時(shí)間:2024-07-30 12:09:05瀏覽次數(shù):1234評(píng)價(jià)

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更多產(chǎn)品
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 200ml/KIT
貨號(hào) P5230 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油
主要用途 分離小鼠外周血單核細(xì)胞。
小鼠外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒
貨號(hào):P5230
規(guī)格:2×200ml/KIT
保存 :室溫避光儲(chǔ)存,有效期少 2 年。

小鼠外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒
貨號(hào):P5230
規(guī)格:2×200ml/KIT
保存 :室溫避光儲(chǔ)存,有效期少 2 年。

小鼠外周血單核細(xì)胞分離液試劑盒

 

規(guī)格:4×200 ml/kit
保存:本產(chǎn)品對(duì)光敏感,應(yīng)該室溫避光儲(chǔ)存,保質(zhì)期 2 年。無(wú)菌開(kāi)封后,保存于室溫。 組成:
試劑A 200mL
試劑D 200mL
全血及組織稀釋液 200mL
細(xì)胞洗滌液 200mL

操作步驟:
1. 取新鮮抗凝全血(EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝血均可)或者去纖維蛋白血液,用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。
2. 取一支無(wú)菌離心管,先加入試劑A,再加入試劑D,使兩者形成梯度界面(試劑A:試劑D的體積比為3:2,如稀釋后的血液樣本小于5ml,則先后加入3ml試劑A和2ml試劑D;如稀釋后的血液樣本大于5ml,試劑總量與稀釋后的血液樣本量相等),兩種試劑的分層一定要清晰。
3. 將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,注意保持兩液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取血液,然后將血液小心的平鋪于分離液上,因?yàn)閮烧叩拿芏炔町悾瑢⑿纬擅黠@的分層界面。如果樣品較多,加樣的時(shí)間較長(zhǎng),在離心之前出現(xiàn)紅細(xì)胞成團(tuán)下沉屬正常現(xiàn)象)
4. 室溫,水平轉(zhuǎn)子500~800g,離心20~30min(血液的體積越大所需的離心力越大,離心時(shí)間越長(zhǎng),的分離條件需自行摸索,離心轉(zhuǎn)速大不超過(guò)1000g)。
5. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層: 層為血漿層;第二層為白色單核細(xì)胞層;第三層為透明試劑D液層;第四層為半透明試劑A液層;第五層為紅細(xì)胞層(如圖示)。
6. 小心吸取第二層試劑D層和第三層乳白色細(xì)胞層到另一無(wú)菌的15ml離心管中,加入10mL細(xì)胞洗滌液或PBS,顛倒混勻,250g,離心10min。
7. 棄上清,5mL的細(xì)胞清洗液或PBS重懸細(xì)胞,250g,離心10min。
8. 重復(fù)步驟7
9. 棄上清,細(xì)胞重懸備用。
10. 差異貼壁法純化細(xì)胞:用單核細(xì)胞培養(yǎng)基以10
6個(gè)/ml的密度重懸細(xì)胞,將細(xì)胞鋪于細(xì)胞板或細(xì)胞瓶中,置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
1) 2~4 h內(nèi)貼壁的為單核細(xì)胞。
2) 10~24 h內(nèi)貼壁的單個(gè)核細(xì)胞為內(nèi)皮、內(nèi)皮祖細(xì)胞、干細(xì)胞 。
3) 不貼壁的為淋巴細(xì)胞。
根據(jù)不同細(xì)胞的貼壁時(shí)間存在差異,以達(dá)到簡(jiǎn)單純化單核細(xì)胞的目的。此法成本低,操作簡(jiǎn)便。如需獲得高純度的目的細(xì)胞則需選用免疫磁珠分選或者是應(yīng)用流式技術(shù)分選細(xì)胞。
血漿層
單核細(xì)胞層
試劑 D
試劑 A
紅細(xì)胞層
分層示意圖

注意事項(xiàng):
A. 開(kāi)封前顛倒混勻,本分離液為無(wú)菌產(chǎn)品,為延長(zhǎng)分離液保存時(shí)間,請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌條件下啟封,避免微生物污染。。
B. 分離液使用時(shí)應(yīng)始終保持室溫(18℃~25℃),如室內(nèi)溫度較低,可將分離液預(yù)熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心,可能會(huì)導(dǎo)致白膜層中紅細(xì)胞污染加重。
C. 血液樣本為新鮮的抗凝血(采血2 h以內(nèi)),為保持單核細(xì)胞的活性,應(yīng)避免冷凍和冷藏。
D. 稀釋血液或洗滌細(xì)胞,不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液,其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集,大大降低細(xì)胞得率及純度。
E. 部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其帶有的靜電作用,可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞掛壁,影響分離效果。
F. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異,可能會(huì)影響分離效果,可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間,摸索分離條件。
G. 吸取過(guò)多的單核細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒細(xì)胞數(shù)量增加;吸取過(guò)多的血漿層可能會(huì)導(dǎo)致單核細(xì)胞中血漿蛋白及血小板污染。
H. 如果要進(jìn)一步對(duì)分離的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),那在收集血液和分離過(guò)程中,注意無(wú)菌操作,避免微生物污染。
I. 不同動(dòng)物血液在不同比重分離液中的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同,用戶在制定分離液時(shí)應(yīng)提供所需分離液的比重、動(dòng)物種屬及被分離細(xì)胞的名稱。 參考文獻(xiàn)
相關(guān)產(chǎn)品:
R1018 細(xì)胞洗滌液
S9020 優(yōu)級(jí)胎牛血清
R1017 全血及組織稀釋液
31800 RPMI Medium 1640
T1300 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)不含酚紅
YA0902 一次性巴氏德吸管
各種其他動(dòng)物及其他細(xì)胞的分離液及試劑盒

參考文獻(xiàn):
《Hydrogen Sulfide Attenuates Hypertensive Inflammation via Regulating Connexin Expression in Spontaneously Hypertensive Rats》 作者:Xin Ni, Liang Zhang, Min Peng, Tu-Wang Shen, Xiu-Shi Yu, Li-Ya Shan, Li Li,Jun-Qiang Si, Xin-Zhi Li and Ke-Tao Macorresponding author 期刊:Medical Science Monitor 影響因子:1.98 PMID:29485979

 

 

 

 

 

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