目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>淀粉系列>> BC1850可溶性淀粉合成酶(SSS)活性檢測試劑盒
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 25T/24S 50T/48S |
| 貨號 | BC1850 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
| 主要用途 | 測定意義：SSS（EC 2.4.1.21）通常以游離態存在于質體基質中,催化淀粉 |
可溶性淀粉合成酶（SSS）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1850
規格：25T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 液體10mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二A | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二B | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
| 試劑二C | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
| 試劑三A | 液體5mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三B | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
| 試劑四 | 液體16μL×1支 | 2-8℃保存 |
| 試劑五A | 液體8mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑五B | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑五C | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
| 試劑六 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
| 試劑七 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：臨用前取1瓶試劑二A加入8mL試劑一，緩慢加熱，逐漸升溫使其溶解，冷卻后加入試劑二B和試劑二C混合溶解，這樣可以分兩批配制并且測定，用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復凍融。
試劑三：臨用前試劑三B加入試劑三A溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融。
試劑四：臨用前先離心，取7 μL試劑四加入2.24 mL溶解好的試劑三混合備用（約14T），現用現配，也可根據樣本量按比例配制。
試劑五：臨用前取試劑五B和試劑五C加入試劑五A溶解備用，用不完的試劑-20℃分裝保存4周，避免反復凍融。
試劑六：臨用前取1支加入208 μL蒸餾水充分溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存2周，避免反復凍融。
試劑七：臨用前加入2mL蒸餾水，用不完的試劑-20℃分裝保存8周，避免反復凍融。
產品說明：
SSS（EC 2.4.1.21）通常以游離態存在于質體基質中，催化淀粉鏈延長，主要負責支鏈淀粉的合成。
SSS催化ADPG與淀粉引物（葡聚糖）反應，將葡萄糖分子轉移到淀粉引物上，同時生成ADP，在反應體系中添加的丙 酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH，NADPH生成量與前一步反應中ADP生成量呈正比，340nm下測定NADPH增加量即可計算SSS活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液槍、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
粗酶液制備：稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g，4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
紫外分光光度計預熱30min以上，調節波長至340nm，蒸餾水調零。
樣本測定：在EP管內按順序加入
| 試劑名稱（μL） | 測定管 |
| 樣本 | 200 |
| 試劑二 | 270 |
| 混勻，30℃保溫20min，置沸水浴中1min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻。 | |
| 試劑四 | 150 |
| 混勻，30℃保溫30min，置沸水浴中1min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻，10000g常溫離心10min，取上清液。37℃預熱試劑五和上清液。 | |
| 上清液 | 450 |
| 試劑五 | 300 |
| 試劑六 | 15 |
| 試劑七 | 15 |
混勻后立即在340nm波長下記錄初始吸光度A1和2min后的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。
注意：試劑二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。
三、SSS活性計算
1、按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
SSS活性（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V測]÷(Cpr×V樣本÷V反總×V上清) ÷T=43.2×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定粗酶液蛋白質濃度。
2、按照樣本質量計算：
單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘催化產生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
SSS活性（U/g 質量）=[ΔA÷（ε×d）×V測]÷(W÷V提取×V樣本÷V反總×V上清) ÷T=43.2×ΔA÷W
V測：測量體積，0.78mL；V反總：反應體積，0.62mL；V提取：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，20min；ε：NADPH消光系數，6.22×10-3mL/(nmol˙cm)；d：石英比色皿光徑，1cm；V樣本：加入樣本的量，0.2mL；V上清：吸取上清液的量，0.45mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。
實驗實例：
取約0.1g肝臟加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g，4℃離心10分鐘，取上清置冰上待測。之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A2-A1=0.394-0.211=0.183，按樣本質量計算酶活得：SSS活性（U/g 質量）=43.2×ΔA÷W=79.056 U/g 質量。
取約0.1g冬青加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g，4℃離心10分鐘，取上清置冰上待測。之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=A2-A1=1.31-1.303=0.007，按樣本質量計算酶活得：SSS活性（U/g 質量）=43.2×ΔA÷W=3.024 U/g 質量。
參考文獻：
Jiang H, Dian W, Wu P. Effect of high temperature on fine structure of amylopectin in rice endosperm by reducing the activity of the starch branching enzyme[J]. Phytochemistry, 2003, 63(1): 53-59.
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