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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>脂肪酸代謝系列>> BC2380-50T/24S肝脂酶(HL)檢測試劑盒 脂肪酸代謝

肝脂酶(HL)檢測試劑盒 脂肪酸代謝
  • 肝脂酶(HL)檢測試劑盒 脂肪酸代謝
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC2380-50T/24S
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-04-15 16:15:40瀏覽次數(shù):628評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T/24S
貨號 BC2380 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合
主要用途 肝酯酶(HL)活性檢測
儲存條件
-20℃
中文名稱
肝脂酶(HL)檢測試劑盒 脂肪酸代謝
有效期
6個月
單位

英文名稱
Hepatic lipase(HL) Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S
自備試劑
該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書


肝脂酶(HL)活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號:BC2380
規(guī)格:50T/24S
產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱規(guī)格保存條件
試劑一液體70 mL×1瓶2-8℃保存
試劑二液體3 mL×1瓶2-8℃保存
試劑三粉劑×12-8℃保存
試劑四粉劑×2-20℃保存
標準品粉劑×12-8℃保存

溶液的配制:
1、試劑三:臨用前加入30 mL蒸餾水,充分溶解待用,用不完的 2-8℃保存8周;
2、試劑四:臨用前取1瓶加入2 mL蒸餾水,充分溶解,用不完的試劑可-20℃分裝保存2周,避免反復凍融;
3、標準品:臨用前加入6.94 mL丙 酮,配成10 μmol/mL α-萘酚標準溶液,充分溶解待用,用不完的-20℃保存4周。
產(chǎn)品說明:
肝脂酶(hepaticlipase,HL)是一種脂肪分解酶,在肝實質(zhì)細胞中合成,存在于肝臟竇周間隙內(nèi)皮細胞表面和竇周間隙腔面的肝細胞微絨毛表面,可水解各種脂蛋白中的甘油三酯(TG)和磷脂(PL),使各種脂蛋白顆粒的大小和密度發(fā)生變化,當血漿中的HL及其活性增高時,可導致血漿中低密度脂蛋白(LDL)水平升高,加速動脈粥樣硬化的發(fā)生與發(fā)展。
肝脂酶水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生α-萘酚,可與固藍B鹽形成紫紅色偶氮化合物,在595 nm有特征吸收峰,其顏色深淺在一定范圍內(nèi)與肝脂酶活性成正相關(guān)。

注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、天平、低溫離心機、水浴鍋、1 mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、EP管、 丙 酮、蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

1、組織:按照質(zhì)量(g)︰試劑一體積(mL)15~10的比例(建議稱取樣本約0.1g,加入1mL試劑一),加入試劑一,冰浴勻漿后于4℃10000 g離心10 min,取上清待測。
2、細胞:按照細胞數(shù)量(104個)︰試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1 mL試劑一)加入試劑一,冰浴超聲波破碎細胞(功率300W,超聲3秒,間隔7秒,總時間3 min);然后于4℃10000g離心10 min,取上清待測。
3、血清/血漿:直接檢測。(若液體有渾濁則離心后進行測定)
二、測定步驟

  1. 分光光度計預熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至595 nm,用蒸餾水調(diào)零。

  2. 將試劑一在30℃預熱20 min以上。

  3. 將10 μmol/mL 的標準溶液用試劑一稀釋為1.25、0.6250.31250.156250.078 μmol/mL的標準溶液備用。

  4. 標準品稀釋表

序號稀釋前濃度(µmol/mL)標準液體積(µL)試劑一體積(µL)稀釋后濃度(µmol/mL)
110503501.25
21.252002000.625
30.6252002000.3125
40.31252002000.15625
50.156252002000.078

實驗中每個標準管需100µL標準溶液。

  1. 操作表:(在1.5 mL離心管中依次加入下列試劑)

試劑名稱對照管測定管標準管空白管
(µL)100100--
標準溶液(µL)--100-
試劑一(µL)450400400500
試劑二(µL)-505050
混勻,30℃反應(yīng)10 min--
試劑三(µL)400400400400
試劑四(µL)50505050
充分混勻,測定595 nm處吸光值,分別記為A對照管、A測定管、A標準管和A空白管。計算ΔA=A測定管-A對照管,ΔA標準=A標準管-A空白管。(每個測定管需設(shè)一個對照管,空白管和標準管需做1-2次)

三、HL酶活計算

  1. 標準曲線的繪制:

根據(jù)標準管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標準(yΔA標準),建立標準曲線。根據(jù)標準曲線,ΔA(y,ΔA帶入公式計算樣本濃度(xμmol/mL)。

  1. HL酶活的計算:

(1)按蛋白濃度計算
酶活定義:每毫克蛋白每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1 μmolα-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性(U/mg prot=x×V÷V×Cpr÷T=0.1x÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計算
酶活定義:每克組織每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1 μmolα-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性(U/g 質(zhì)量)=x×V÷W×V÷V樣總)÷T=0.1x÷W
(3)按照細胞數(shù)量計算
酶活定義:每104個細胞每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1 μmolα-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性(U/104 cell)=x×V÷V×N÷V樣總)÷T=0.1x÷N
(4)按液體體積計算
酶活定義:每毫升血清/血漿每分鐘水解α-乙酸萘酯產(chǎn)生1μmolα-萘酚為一個酶活力單位。
HL活性(U/mL=x×V÷V÷T=0.1x
V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.1 mLCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測定;W:樣本質(zhì)量,gV樣總:加入試劑一體積,1 mLT:反應(yīng)時間,10 minN:細胞數(shù)量,以萬計
注意事項:

  1. 若樣本為動物肝臟,建議將樣本用試劑一稀釋25倍以上再進行檢測,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

  2. 若樣本為肥胖型動物血清或血漿,建議將樣本用試劑一稀釋5倍以上再進行檢測,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

  3. ΔA大于0.8時,建議將樣本用試劑一稀釋后再進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

實驗實例:

  1. 取0.1g大鼠肝臟,進行樣本處理,取上清稀釋48倍后按照操作步驟進行操作,測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.713-0.001=0.712,帶入標準曲線y = 0.6381x - 0.0005,計算x=1.1166,按照樣本質(zhì)量計算酶活得:HL活性(U/g 質(zhì)量)=x×V÷W×V÷V樣總)÷T×48=53.597 U/g 質(zhì)量。

  2. 取火雞血清稀釋12倍后按照操作步驟進行操作,測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.572-0.003=0.569,帶入標準曲線y = 0.6381x - 0.0005,計算x=0.892,按照液體體積計算酶活得:HL活性(U/mL=x×V÷V÷T×12=1.071 U/mL

相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC2340/BC2345  脂肪酶(LPS)活性檢測試劑盒
BC0620/BC0625  甘油三酯(TG)含量檢測試劑盒
BC2440/BC2445  脂蛋白酯酶(LPL)活性檢測試劑盒
BC0320/BC0325  植物中脂氧合酶(LOX)活性檢測試劑盒
BC0590/BC0595  游離脂肪酸(FFA)含量檢測試劑盒

肝脂酶(HL)檢測試劑盒 脂肪酸代謝 肝脂酶(HL)檢測試劑盒 脂肪酸代謝

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