目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>蔗糖系列>> BC4310-50T/24S蔗糖合成酶活性檢測試劑盒
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/24S |
貨號 | BC4310 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
主要用途 | 蔗糖合成酶活性檢測 |
蔗糖合成酶(分解方向;SS-I)活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號: BC4310
規格: 50T/24S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體8 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
試劑三 | 液體8 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 試劑二:臨用前加入2.5 mL試劑一充分溶解待用,用不完的試劑建議分裝后,-20℃保存,避免反復凍融;
2、 標準品:20 mg果糖,臨用前加入1 mL蒸餾水溶解,配成20 mg/mL果糖溶液備用,2-8℃保存一周。
產品說明:
蔗糖合成酶(Sucrose Synthase,SS)是植物糖代謝過程的關鍵酶,負責催化蔗糖分解與合成的可逆反應,其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG與果糖, 參與淀粉、纖維素和半纖維素的合成等代謝途徑。
分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖與UDPG,果糖與3,5 -二硝基水楊酸反應生成在540nm有特征吸收峰的棕紅色物質,通過測定540nm處吸光值變化可計算得SS-I活性。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式低溫離心機、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,8000g,離心10min,取上清置于冰上待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計預熱30min以上,調節波長至540nm,蒸餾水調零。
2、 將20mg/mL標準液用蒸餾水稀釋為5、4、3、2、1mg/mL的標準溶液備用。
3、 操作表 (在1.5mL離心管中操作) :
試劑名稱(µL) | 對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本 | 20 | 20 | - | - |
標準溶液 | - | - | 20 | - |
蒸餾水 | - | - | - | 20 |
試劑一 | 80 | 80 | 80 | |
試劑二 | - | 80 | - | - |
混勻,30℃水浴30 min后,95℃水浴10 min(蓋緊,防止水分散失)。 | ||||
試劑三 | 100 | 100 | 100 | 100 |
混勻,沸水浴5 min(蓋緊,防止水分散失),冷卻至室溫。 | ||||
蒸餾水 | 800 | 800 | 800 | 800 |
混勻,置于1mL玻璃比色皿中,測定540nm處吸光值A,分別記為A對照管,A測定管,A標準管,A空白管。計算ΔA=A測定管-A對照管,ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設一個對照管(標準曲線只需檢測1-2次)。 |
三、SS-I活性計算
1、 標準曲線的繪制:
以各個標準溶液的濃度為x軸,其對應的ΔA標準為y軸,繪制標準曲線,得到標準方程y=kx+b,將ΔA帶入方程得到x(mg/mL)。
2、 SS-I活性的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
酶活定義:每mg蛋白每分鐘分解蔗糖產生1µg果糖為1個酶活力單位。
SS-I酶活(U/mg prot)=x×V提取÷(V提取×Cpr)×103÷T = 33.33x÷Cpr
(2)按樣本質量計算
酶活定義:每g樣本每分鐘分解蔗糖產生1µg果糖為1個酶活力單位。
SS-I酶活(U/g質量)=x×V提取×103÷W÷T = 33.33x÷W
V提取:提取液體積,1mL;103:單位換算系數,1mg=103µg;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測定;W:樣本質量,g;T:反應時間:30min。
注意事項:
1. 當A或ΔA超過1時,建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定,計算公式中乘以稀釋倍數。
2. 95℃水浴時EP管蓋緊,防止水分散失,待冷卻至室溫后(建議每次實驗后冷卻時間保持一致),再進行下一步操作,避免液體飛濺燙傷以及影響試驗數據。
實驗實例:
1. 取0.1g黑麥草加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清后按照測定步驟操作,測得A對照管=0.128,A測定管=0.667,標準曲線y=0.1981x-0.0491,A空白管=0.014,計算ΔA=A測定管-A對照管=0.667-0.128=0.539,x=(0.539+0.0491) ÷0.1981=2.9687,按樣本質量計算酶活:
SS-I酶活(U/g質量)=33.33x÷W=33.33×2.9687÷0.1=989.4677 U/g質量。
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