目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>輔酶Ⅱ系列>> BC1130-50T/48SNAD-蘋果酸酶(NAD-ME)活性檢測試劑盒 輔酶
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/48S |
貨號 | BC1130 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
主要用途 | NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測 |
NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號:BC1130
規格:50T/48S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體70 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×2支 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
溶液的配制:
試劑二:臨用前加入20 mL提取液充分溶解備用;
試劑三:臨用前每支加1 mL雙蒸水充分溶解備用;
試劑四:用時每支加500 μL雙蒸水充分溶解備用;
工作液:在15 mL試劑二中加入2 mL試劑三和1 mL試劑四,可以根據比例現用現配。
產品說明:
ME廣泛存在于微生物、培養細胞、動物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應,產生*酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應,是蘋果酸代謝的關鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物ME活性測定較多,已經成為抗氧化研究的熱點。根據輔酶專一性和對底物特異性的不同,可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。
NAD-ME催化NAD+還原成NADH,在340nm下測定NADH增加速率。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產品資料"附件
實驗實例:
取0.1g肝加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清,按照測定步驟操作,測得計算ΔA=A2-A1=0.929-0.665=0.264,按樣本質量計算酶活得:
NAD-ME(U/g 質量)=965×ΔA÷W=965×0.264÷0.1=2547.6 U/g 質量。
參考文獻:
Spampinato C P, Colombo S L, Andreo C S. Interaction of analogues of substrate with NADP-malic enzyme from maize leaves[J]. Photosynthesis research, 1994, 39(1): 67-73.
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