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更新時(shí)間:2022-08-07 07:41:20瀏覽次數(shù):1405評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 25管/24樣 |
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貨號(hào) | BC2170 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
主要用途 | 線粒體檸檬酸(MCA)含量檢測(cè) |
線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒 三羧酸循環(huán)
線粒體檸檬酸(MCA)含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書 紫外分光光度法
注意:正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
貨號(hào):BC2170
規(guī)格:25T/24S
產(chǎn)品內(nèi)容:
酸性提取液:液體 25 mL×1 瓶,4℃保存。
堿性提取液:液體 25 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 7.5mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 2.5mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 7.5mL 蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑 4℃保 存。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體 1mL×1 支,10µmol/mL 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明: CA 是線粒體三羧酸循環(huán)的第1個(gè)中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰 CoA 與草酰乙酸合成,其 含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。 CA 在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進(jìn)一步與苯 肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在 330nm 處有吸收峰,該波長(zhǎng)下吸光度的變化程度可 反應(yīng)出 CA 的含量。
自備儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL 石英比色皿、研缽和蒸餾水。
操作步驟:
一、線粒體中檸檬酸提取:
1. 稱約 0.05-0.1g 組織(建議稱 0.1g 樣本),加入 0.5mL 酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃ 離心 5min,取上清另一 EP 管中,11000g/min 4℃離心 10min,棄上清(取 300µL 該上清液和 300µL 堿性提取液中和后可用于細(xì)胞質(zhì) CA 含量測(cè)定);
沉淀即線粒體,向沉淀中加入 0.5mL 酸 性提取液,充分懸浮溶解,超聲波破碎(功率 20%,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復(fù) 30 次),取此 溶液 300µL 和 300µL 堿性提取液中和,混勻,置冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定)。
相關(guān)文獻(xiàn):
《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death and Disease 影響因子:5.959 PMID:30850587
線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒 三羧酸循環(huán)
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