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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5805-100T/96S蛋白質總巰基含量檢測試劑盒 微量法

蛋白質總巰基含量檢測試劑盒 微量法
  • 蛋白質總巰基含量檢測試劑盒 微量法
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC5805-100T/96S
  • 廠商性質 生產商
  • 產品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-04-23 14:55:31瀏覽次數:697評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現貨 規格 100T/96S
貨號 BC5805 應用領域 環保,化工,生物產業,農業,綜合
主要用途 蛋白質總巰基含量檢測
有效期
6個月
儲存條件
2-8℃
中文名稱
蛋白質總巰基含量檢測試劑盒 微量法
單位

英文名稱
Total Protein Thiol Content Assay Kit
檢測方法
微量法
規格
100T/96S
自備試劑
該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網站說明書

蛋白質總巰基含量檢測試劑盒說明書

微量法

貨號:BC5805

規格:100T/96S

產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規格

保存條件

提取液一

液體70 mL×1

2-8℃保存

提取液二

液體70 mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體110 mL×2

2-8℃保存

試劑二

液體20 mL×1

2-8℃保存

試劑三

液體7 mL×1

2-8℃保存

試劑四

液體1.2 mL×1

2-8℃保存

粉劑一

粉劑×1

2-8℃保存

標準品

粉劑×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 提取液配制:臨用前根據樣本量按照提取液一:提取液二=1mL1 mL進行配制,現配現用,請勿一次性全部混合

2、 若試劑二有析出,可置于37℃水浴加熱至澄清透明后使用。

3、 標準品:10mg還原型谷*肽(GSH)。臨用前加入1.3mL蒸餾水配制成25μmol/mL2-8℃保存4

4、 0.125μmol/mL標準品配制:取50μL 25μmol/mL標準品,加入950μL蒸餾水,充分混勻,配制成1.25μmol/mL的標準品;然后取100μL 1.25μmol/mL標準品,加入900μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.125μmol/mL的標準品使用,現配現用。

產品說明:

巰基的存在使得蛋白質能夠進行二硫鍵的形成,從而維持分子的穩定性和功能性。巰基還參與到氧化還原反應中,具有重要的生物學作用。在細胞內,巰基含量的變化與多種疾病的發生和進展密切相關,因此巰基也成為了生物醫學領域中的重要研究對象。本試劑盒測定的是蛋白質二硫鍵斷裂產生的巰基和本身游離巰基的總和。

還原劑會使二硫鍵裂解生成巰基,巰基會發生親核反應,即巰基與5,5’-二硫代--硝基苯甲酸(DTNB)反應,生成黃色化合物,在412nm處有最大吸收峰,據此可以計算蛋白質總巰基含量。


注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、丙酮(AR)

 

蒸餾水。

操作步驟

一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

組織:按照質量(g:提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃3000rpm 離心10min棄上清。在沉淀中加入2mL試劑一,攪勻后溶解沉淀,沉淀溶解液作為樣本進行實驗。(注:(1)植物葉片等纖維含量較高的樣本,溶解沉淀后4℃ 3000rpm離心3min,取上清作為樣本進行實驗,;(2)加入試劑一后會有大量氣泡產生,請緩慢加入,建議使用5mLEP)。

細菌/細胞:按照細菌/細胞數量(106個):提取液體積(mL)為5~101的比例(建議5百萬細菌/細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎(功率200W,超聲3秒,間隔10秒,總時間3min)后,于4℃3000rpm 離心10min,棄上清。在沉淀中加入2mL試劑一,攪勻后溶解沉淀,沉淀溶解液作為樣本進行實驗。(注:(1)若沉淀溶解不全,可4℃ 3000rpm離心3min,取上清作為樣本進行實驗;(2)加入試劑一后會有大量氣泡產生,請緩慢加入,建議使用5mLEP管)

血清/血漿、牛奶等液體:100μL液體樣本加入0.9mL丙酮4℃3000rpm 離心10min棄上清。在沉淀中加入2mL試劑一,攪勻后溶解沉淀,沉淀溶解液作為樣本進行實驗。(注:若測定數值偏小,可改變樣本與丙酮的比例,如0.2mL液體樣本加入0.8mL丙酮或0.3mL液體樣本加入0.7mL丙酮,注意同步修改計算公式)。

二、測定步驟

1、 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調節波長至412nm,分光光度計蒸餾水調零。

2、 操作表:(建議在2mLEP管中操作

試劑名稱(mL

測定管

空白管

標準管

樣本

0.3

-

-

蒸餾水

-

0.3

-

標準品

-

-

0.3

粉劑一

3 mg

-

-

開蓋反應30min,期間每隔10min用吸頭吹打至氣泡不再產生,禁止扣蓋

-

-

提取液

0.18

0.18

0.18

緩慢加入提取液混勻,并用吸頭反復吹打至氣泡不再產生(期間會有大量氣泡產生,開蓋放置)

-

-

試劑二

0.18

0.18

0.18

充分混勻,4℃ 3000rpm離心10min后取上清于1.5mL EP管中

-

-

上清液

0.14

0.14

0.14

試劑三

0.05

0.05

0.05

充分混勻,測定412nm下的吸光度,記為A對照

-

-

試劑四

0.01

0.01

0.01

充分混勻,室溫靜置10min后測定412nm下的吸光度,分別記為A測定A空白、A標準。計算ΔA測定=A測定-A對照,ΔA標準=A標準-A空白。空白管和標準只需測1-2次。

注:第一步測定412nm吸光度時,可將反應液全部倒入96孔板中/微量玻璃比色皿中測定,之后可直接在96孔板中/微量玻璃比色皿中加入試劑四混勻后繼續測定。

 

 

 

三、蛋白質總巰基含量的計算

1. 按照樣本蛋白濃度計算

蛋白質總巰基含量(μmol/mg prot=ΔA測定÷ΔA標準÷C標準)×V樣本÷V樣本×Cpr×F

=0.125× ΔA測定÷ΔA標準×Cpr×F

2. 按照樣本質量計算

蛋白質總巰基含量(μmol/g 質量)=ΔA測定÷ΔA標準÷C標準)×V試劑一÷W×F

=0.25×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F

3. 按照液體體積計算

蛋白質總巰基含量(μmol/mL=ΔA測定÷ΔA標準÷C標準)×V試劑一÷V液樣=2.5×ΔA測定÷ΔA標準×F

4. 按照細胞/細菌數量計算:

蛋白質總巰基含量(μmol/106 cell=ΔA測定÷ΔA標準÷C標準)×V試劑一÷N÷2×F=0.25×ΔA測定÷ΔA標準÷N×F

C標準:標準管濃度,0.125μmol/mLV樣本:加入的樣本體積,0.3mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL,蛋白濃度需自行測定推薦使用BCA方法測定W:樣本質量,gV試劑一:提取時加入試劑一體積,2mLV液樣:提取時加入的樣本體積,0.1mLF:稀釋倍數;N:細胞/細菌總數,以106計。

注意事項:

1. 若樣本ΔA測定<0.01,可適當增大樣本量后測定,注意同步修改空白管和標準管及計算公式;若樣本ΔA測定>1.5,可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測定,注意同步修改計算公式中的稀釋倍數。

實驗實例:

1、 100μL馬血清,按照測定步驟操作,用96孔板測得ΔA測定=A測定-A對照=0.348-0.045=0.303ΔA標準=A標準-A空白=0.417-0.105=0.312,按樣本液體體積計算蛋白質總巰基含量得:

蛋白質總巰基含量(μmol/mL= 2.5×ΔA測定÷ΔA標準×F =2.428μmol/mL

2、 0.1036g鼠肝,按照測定步驟操作,用96孔板測得ΔA測定=A測定-A對照=0.475-0.107=0.368ΔA標準=A標準-A空白=0.417-0.105=0.312,按樣本質量計算蛋白質總巰基含量得:

蛋白質總巰基含量(μmol/g 質量=0.25×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =2.846μmol/g 質量

3、 0.1078g黃豆粉,沉淀溶解液用試劑一稀釋2倍后,按照測定步驟操作,用96孔板測得ΔA測定=A測定-A對照=0.762-0.084=0.678ΔA標準=A標準-A空白=0.417-0.105=0.312,按樣本質量計算蛋白質總巰基含量得:

蛋白質總巰基含量(μmol/g 質量=0.25×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =10.079μmol/g 質量

相關系列產品:

BC1370/BC1375 總巰基含量檢測試劑盒

BC1430/BC1435 非蛋白巰基含量檢測試劑盒

BC5790/BC5795 蛋白質二硫鍵含量檢測試劑盒

BC5890/BC5895 蛋白質游離巰基含量檢測試劑盒


 蛋白質總巰基含量檢測試劑盒 微量法 蛋白質總巰基含量檢測試劑盒 微量法

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