目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5485-100T/96S一氧化氮(NO)含量檢測(cè)試劑盒(化學(xué)法)
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更新時(shí)間:2024-04-23 09:39:44瀏覽次數(shù):614評(píng)價(jià)
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CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
貨號(hào) | BC5485 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 一氧化氮(NO)含量檢測(cè) |
一氧化氮(NO)含量檢測(cè)試劑盒說明書(化學(xué)法)
微量法
貨號(hào):BC5485
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色液A液 | 2-8℃保存 | |
顯色液B液 | 液體6 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 試劑一:臨用前加入6mL蒸餾水,可50℃助溶,2-8 ℃可保存12周。冷卻至常溫使用;
2、 顯色液:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照顯色液A液:顯色液B液=50μL: 50μL(100μL,1T)的比例配制顯色液,充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用;
3、 標(biāo)準(zhǔn)品:10μmol/mL亞*酸鈉。
4、 0.05μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:取50μL 10μmol/mL亞*酸鈉,加入950μL蒸餾水,配制濃度為0.5 μmol/mL;再取100μL 0.5μmol/mL亞*酸鈉和900μL蒸餾水混勻配制成0.05 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
產(chǎn)品說明:
一氧化氮(Nitric Oxide,NO)是一種極不穩(wěn)定的生物自由基,分子小,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,常溫下為氣體,微溶于水,具有脂溶性,可快速透過生物膜擴(kuò)散,作為一種新型的生物信使分子,在細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮傳遞信號(hào)的作用。其廣泛分布于生物體內(nèi)各組織中,特別是神經(jīng)組織中。在機(jī)體神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中也起著十分重要的作用。
NO在體內(nèi)或水溶液中極易氧化生成NO2-。在酸性條件下,NO2-與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物,進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合,產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰,測(cè)定其吸光值,可以計(jì)算NO含量。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、分析天平、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1. 組織樣本:按質(zhì)量(g): 提取液體積(mL)2 ~5:10的比例加入提取液(建議稱取0.2g樣本,加入1.0mL提取液),冰浴勻漿后,于4℃,10000g,離心15min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(104):提取液體積(mL)1000~2000 : 1的比例加入提取液(建議1000萬細(xì)菌/細(xì)胞加入1.0mL提取液),冰浴超聲破碎細(xì)菌/細(xì)胞(功率200W,超聲3s,間隔7s,總時(shí)間5min),然后于4℃,10000g,離心15min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測(cè)。
3. 血清(血漿)等液體樣本:直接測(cè)定。若液體有渾濁則離心取上清測(cè)定。
二、測(cè)定步驟
1.可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至550nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
2.在1.5mL EP管按下表順序加樣:
試劑名稱(μL) | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
蒸餾水 | - | - | 100 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | - | 100 | - |
樣本 | 100 | - | - |
試劑一 | 50 | 50 | 50 |
充分混勻,常溫靜置5min,于4℃,10000g離心5min,取上清 | |||
上清液 | 100 | 100 | 100 |
顯色液 | 100 | 100 | 100 |
混勻,常溫靜置10min,于550nm處測(cè)定各管吸光值,分別記為A測(cè)定、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白,計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)1-2次。 |
三、NO含量計(jì)算
1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算
NO含量(μmol/mg prot)= ΔA測(cè)定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷(V樣×Cpr) = 0.05×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
2. 按樣本質(zhì)量計(jì)算
NO含量(μmol/g 質(zhì)量)= ΔA測(cè)定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷(W×V樣÷V樣總) = 0.05×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
3. 按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
NO含量(μmol/104 cell)=ΔA測(cè)定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷(V樣×N÷V樣總) =0.05 ×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N
4. 按液體體積計(jì)算
NO含量(μmol/mL)= ΔA測(cè)定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷V樣= 0.05×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)
C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.05μmol/mL;V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;N:細(xì)菌/細(xì)胞總數(shù),以104計(jì)。
注意事項(xiàng):
1、 如果?A測(cè)定小于0.005,可以增加樣本量后再進(jìn)行測(cè)定;如果?A測(cè)定大于0.7,建議將樣本上清用提取液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。
2、 如果樣本上清有顏色(在550nm下有吸收峰),則需要補(bǔ)測(cè)樣本的對(duì)照管,即將顯色液用相同體積的蒸餾水代替。在550 nm下測(cè)定吸光值A,分別記為 A標(biāo)準(zhǔn)、A測(cè)定、A空白、A對(duì)照,計(jì)算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白,ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照。此時(shí)試劑盒規(guī)格為100T/48S。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
1. 取0.203g合歡葉片樣本,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算:ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.082-0.047=0.035,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.402-0.047=0.355,按樣本質(zhì)量計(jì)算得:
NO含量(μmol/g 質(zhì)量)=0.05×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W = 0.0243 μmol/g 質(zhì)量。
2. 取0.215g小鼠心臟樣本,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算:ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.102-0.047=0.055,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.402-0.047=0.355,按樣本質(zhì)量計(jì)算得:
NO含量(μmol/g 質(zhì)量)=0.05×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W = 0.0360 μmol/g 質(zhì)量。
3. 取100μL人血清樣本,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算:ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.071-0.047=0.024,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.402-0.047=0.355,按液體體積計(jì)算得:
NO含量(μmol/mL)=0.05×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn) = 0.0034μmol/mL。
參考文獻(xiàn):
[1] Green LC, Wagner DA, Glogowski J. et al. Analysis of nitrate, nitrite, and [15N]nitrate in biological fluids[J]. Analytical Biochemistry, 1982, 126(1): 131-138.
[2] Thomsen LL, Ching LM, Baguley BC. Evidence for the production of nitric oxide by activated macrophages treated with the antitumor agents flavone-8-acetic acid and xanthenone-4-acetic acid [J]. Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 1990, 50(21): 6966-6970.
[3] Yang Wenping, Li Junmin, Wang Jinwen. Comparison of determination methods of serum nitric oxide content[J]. Experimental and Laboratory Medicine, 2002, 20(03): 147-148.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
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一氧化氮(NO)含量檢測(cè)試劑盒(化學(xué)法) 一氧化氮(NO)含量檢測(cè)試劑盒(化學(xué)法)
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