目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>氧化系列>> BC5670-50T/24S組胺含量檢測試劑盒 氧化
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/24S |
貨號 | BC5670 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
主要用途 | 組胺含量檢測 |
組胺含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號:BC5670
規格:50T/24S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體45 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2支 | 2-8℃保存 |
試劑二稀釋液 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體12 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
粉劑一 | 粉劑3 g×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1. 試劑二:臨用前一支試劑二加入65μL蒸餾水溶解,2-8℃可保存4周。
2. 試劑二工作液的配制:根據樣本量按照試劑二:試劑二稀釋液=10μL:300μL(共310μL,約3S)的比例配制,現配現用。
3. 標準品:10μmol/mL組胺標準液。
4. 0.1875μmol/mL標準品配制:取75μL10μmol/mL組胺標準液,加入925mL蒸餾水,混勻配制成0.75μmol/mL的組胺標準品;再吸取250μL 0.75μmol/mL組胺和750 μL蒸餾水混合配制成0.1875μmol/mL的組胺標準溶液備用。
產品說明:
組胺(Histamine)是一種有潛在危害的含氮低分子量有機化合物,是由組*在脫羧酶的作用下產生的。當組織受到損傷或發生炎癥和過敏反應時,都可釋放組胺。組胺廣泛存在于各種食品中,攝入過量的組胺會對人體產生危害。組胺會被組胺脫氫酶(HDH)特異性分解,在1-mPMS作用下,電子轉移通過WST顯色,在470nm下有最大吸收峰,據此可以計算組胺含量。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、低溫離心機、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、水浴鍋/恒溫培養箱、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
1. 組織:按照質量(g):提取液一體積(mL)為1:2.5~5的比例(建議稱取約0.2g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后,于60℃水浴30min,冷卻至室溫后于4℃ 10000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產生,4℃ 10000g離心10min后取上清待測。
2. 紅酒等(酚類含量高)液體:稱取粉劑一0.05g,加入500μL液體樣本和500μL提取液一,冰浴勻漿后,于60℃水浴30min,冷卻至室溫后于4℃ 12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產生,4℃ 10000g離心10min后取上清待測。
注:1、提取液二需緩慢加入,加入后會產生大量氣泡,建議使用2mL EP管進行操作。
2、樣本提取后盡可能在2小時內測定結束,若樣本量過多建議分批次處理。
3、含酚類高的樣本,前處理時加入粉劑一約0.05g,與樣本一起冰浴勻漿。如紅酒,前處理時取500μL液體樣本加入500μL提取液一,和粉劑一約0.05g(無需準確稱量),之后按照液體樣本繼續進行冰浴勻漿后等后續處理。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計預熱30min以上,調節波長至470nm,蒸餾水調零。
2、 試劑一37℃預熱15min。
3、 操作表:(在1.5mLEP管中依次加入以下試劑)
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 | 空白管 | 標準管 |
試劑一 | 650 | 750 | 650 | 650 |
試劑二工作液 | 100 | - | 100 | 100 |
試劑三 | 150 | 150 | 150 | 150 |
蒸餾水 | - | - | 100 | - |
樣本 | 100 | 100 | - | - |
標準品 | - | - | - | 100 |
充分混勻,37℃避光反應15min,取反應液于1mL玻璃比色皿中,測定470nm處吸光值A,記為A測定、A對照、A空白、A標準,計算ΔA測定=A測定-A對照,ΔA標準=A標準-A空白。空白管和標準管只需測1-2次。 |
三、組胺含量的計算
1. 按照蛋白濃度計算
組胺含量(μmol/mg prot)=ΔA測定×C標準÷ΔA標準×V樣本÷(V樣本×Cpr)×F
=0.1875×ΔA測定÷ΔA標準×Cpr×F
C標準:標準管濃度,0.1875μmol/mL;V樣本:加入的樣本體積,0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL,蛋白濃度需自行測定;F:稀釋倍數。
2. 按照樣本質量計算
組胺含量(μmol/g 質量)=ΔA測定×C標準÷ΔA標準×(V上清+V提取液二)÷(W×V上清÷V提取液一)×F =0.223×ΔA測定÷ΔA標準÷W×FC標準:標準管濃度,0.1875μmol/mL;W:樣本質量,g;V上清:提取時上清液體積,0.8mL;V提取液二:加入的提取液二體積,0.15mL;V提取液一:加入的提取液一體積,1mL;F:稀釋倍數。
3. 按照液體體積計算
組胺含量(μmol/mL)
=ΔA測定×C標準÷ΔA標準×(V上清+V提取液二)÷ [V液體×V上清÷(V提取液一+V液體)] ×F
=0.445×ΔA測定÷ΔA標準×F
C標準:標準管濃度,0.1875μmol/mL;V上清:提取時上清液體積,0.8mL;V提取液二:加入的提取液二體積,0.15mL;V提取液一:加入的提取液一體積,0.5mL;V液體:液體樣本體積,0.5mL;F:稀釋倍數。
注意事項:
1. 提取液一中含有蛋白質沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量,需另取組織。
2. 如果樣本測定吸光值小于0.05或接近空白管吸光值,可適當增大樣本量,空白管和標準管也需要進行相應調整,注意同步修改計算公式。
3. ΔA測定大于1或者A測定大于1.5時,可用整理水稀釋樣本進行測定。
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