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尿蛋白含量檢測試劑盒說明書（麗春紅比色法）

微量法

貨號：BC5655

規格：100T/96S

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一工作液：臨用前根據樣本數量按照試劑一：蒸餾水=0.1mL：0.9mL（1mL，1T）的比例配制試劑一工作液；

2、 標準品：5mg/mL BSA標準液。臨用前取80μL 5mg/mL BSA標準液，加入920μL蒸餾水，配制成0.4 mg/mL BSA標準液，現用現配。

產品說明：

尿液中蛋白含量增加，表明腎臟系統的重吸收作用減弱，通常可作為腎臟疾病臨床診斷的輔助依據。

在尿液樣本中加入蛋白沉淀劑和麗春紅染料，離心得到的蛋白質-染料復合物可溶解于堿性溶液，檢測其在560nm處的吸光值可計算得到樣本蛋白含量。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、2mL EP管、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理

1. 尿液等液體樣本：直接測定。若有渾濁請離心后取上清置于冰上待測。

二、測定步驟

1．可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至560nm，分光光度計蒸餾水調零。

2．操作表：

三、尿蛋白含量計算

尿蛋白含量（mg/mL）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷V樣= 0.4×ΔA測定÷ΔA標準

C標：標準管濃度，0.4mg/mL；V樣：加入樣本體積，0.4mL。

注意事項：

1、 實驗過程中離心步驟結束后，上清液需要全部除去，同時不可損失沉淀，否則會影響比色結果。

2、 如果?A測定小于0.006或測定管吸光值接近空白管，可以增加樣本量后再進行測定；如果?A測定大于0.4，建議將樣本用蒸餾水適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。

參考文獻：

[1] Michael A Pesce, Carl S Strande. A new micromethod for determination of protein in cerebrospinal fluid and urine[J]. Clinical Biochemistry, 1973, 19(11): 1265-1267. 

[2] Jean Dube, Joel Girouard, Pierre Leclerc. et al. Problems with the estimation of urine protein by automated assays[J]. Clinical Biochemistry, 2005, 38(5): 479-485.

[3] Pan Ya. An analysis about the quantitative measurement of urinary protein[J]. China Health Standard Management, 2014, 5(18): 125-126. 

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