目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>其它系列>> BC5590-50T/48S游離血紅蛋白(FHb)含量檢測試劑盒 其它
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
貨號 | BC5590 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 游離血紅蛋白(FHb)含量檢測 |
游離血紅蛋白(FHb)含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號:BC5590
規(guī)格:50T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體40mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體40mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體2mL×1支 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1. 工作液:臨用前根據(jù)樣本量按照試劑一:試劑二:試劑三=500μL:500μL:25μL(1.025mL,約1T)的比例配制工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品:5mg血紅蛋白,臨用前加入1mL蒸餾水,充分混勻,配制成5mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液,2-8℃可保存4周。
產(chǎn)品說明:
血管內(nèi)發(fā)生溶血時,紅細(xì)胞破裂,釋放出血紅蛋白,血漿中游離血紅蛋白(free hemoglobin,FHb)增多。自身免疫性溶血性貧血、鐮刀型細(xì)胞貧血、珠蛋白生成障礙性貧血患者血漿FHb有輕度至中度增加,陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、陣發(fā)性嚴(yán)寒性血紅蛋白尿癥、不穩(wěn)定血紅蛋白病等會出現(xiàn)血尿癥狀。因此,血漿中FHb的測定對于臨床診斷溶血性疾病有重要作用。
血紅蛋白中的亞鐵血紅素有類似過氧化物酶的催化活性,能夠催化過氧化氫氧化4-氨基安*比林和苯胺類似物,生成紫色化合物,其在546nm有特征吸收峰,其顏色深淺與FHb含量成正比。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理
血漿等液體:直接測定。若有渾濁請離心后取上清置于冰上待測。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至546nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:將5mg/mL(5000mg/L)血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水進(jìn)行稀釋得到156.25、78.125、39.063、19.531、9.766、4.883mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3、 標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋可參考下表:
序號 | 稀釋前濃度(mg/L) | 標(biāo)準(zhǔn)溶液體積(µL) | 蒸餾水體積(µL) | 稀釋后濃度(mg/L) |
1 | 5000 | 25 | 775 | 156.25 |
2 | 156.25 | 100 | 100 | 78.125 |
3 | 78.125 | 100 | 100 | 39.063 |
4 | 39.063 | 100 | 100 | 19.531 |
5 | 19.531 | 100 | 100 | 9.766 |
6 | 9.766 | 100 | 100 | 4.883 |
備注:實(shí)驗(yàn)中每個標(biāo)準(zhǔn)管需60µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
4、 將工作液37℃預(yù)熱15min。
5、 在1mL玻璃比色皿中按下表步驟加樣:
試劑名稱(µL) | 空白管 | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
蒸餾水 | 60 | - | - |
樣本 | - | 60 | - |
標(biāo)準(zhǔn)溶液 | - | - | 60 |
工作液 | 1000 | 1000 | 1000 |
充分混勻,37℃反應(yīng)5min,測定546nm處吸光值A,分別記為A空白、A測定、A標(biāo)準(zhǔn),計算ΔA測定= A測定-A空白,ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。空白管和標(biāo)準(zhǔn)曲線只需測定1-2次。 |
三、游離血紅蛋白(FHb)含量計算
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,mg/L)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(y,ΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA測定(y,ΔA測定)帶入公式計算樣本濃度(x,mg/L)。
2. FHb含量的計算:
游離血紅蛋白(FHb)含量(mg/L)=x×F
F:樣本稀釋倍數(shù)。
注意事項(xiàng):
1. 若測定血漿樣本,采樣和分離血漿過程中避免發(fā)生溶血。
2. 若樣本測定管吸光值A(chǔ)測定>1,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測定。
3. 若樣本測定管吸光值A(chǔ)測定<0.01或接近空白管吸光值,建議將樣本加樣量增大后再進(jìn)行測定,空白管和標(biāo)準(zhǔn)管加樣量也需進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
1. 取60µL兔血清樣本,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA測定=A測定-A空白= 0.216-0.064= 0.152,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.007x-0.0075,R2=0.9981。計算x=22.786,計算FHb含量得:
游離血紅蛋白(FHb)含量(mg/L)=x×F=22.786 mg/L。
2. 取60µL馬血清樣本,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA測定=A測定-A空白= 0.166-0.064= 0.102,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.007x-0.0075,R2=0.9981。計算x=15.643,計算FHb含量得:
游離血紅蛋白(FHb)含量(mg/L)=x×F=15.643 mg/L。
參考文獻(xiàn):
[1] Reeder B, Svistun enko D, Cooper C, et al. The radical and redox chemistry of myoglobin and hemoglobin: from in vitro studies to human pathology [J]. Antioxid Redox Signal, 2004, 6(6): 954-966.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC1730/BC1735 血清鐵濃度檢測試劑盒
BC5410/BC5415 亞鐵離子含量檢測試劑盒
BC5580/BC5585 血紅蛋白(Hb)含量檢測試劑盒
BC5600/BC5605 高鐵血紅蛋白(MetHb)含量檢測試劑盒
BC5610/BC5615 糖化血紅蛋白(G Hb)含量檢測試劑盒
游離血紅蛋白(FHb)含量檢測試劑盒 其它 游離血紅蛋白(FHb)含量檢測試劑盒 其它
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