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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>氧化系列>> BC5240-50T/48S脂質過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 氧化

脂質過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 氧化
  • 脂質過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 氧化
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC5240-50T/48S
  • 廠商性質 生產商
  • 產品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-04-19 09:18:15瀏覽次數:999評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現貨 規格 50T/48S
貨號 BC5240 應用領域 環保,化工,生物產業,農業,綜合
主要用途 脂質過氧化物(LPO)含量檢測
脂質過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒 氧化
儲存條件
2-8℃
有效期
6個月
單位

英文名稱
Lipid Peroxide (LPO) Content Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規格
50T/48S

脂質過氧化物(LPO)含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號:BC5240

規格:50T/48S

產品內容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規格

保存條件

提取液

液體60mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體20mL×1

2-8℃保存

試劑二

粉劑×2

2-8℃保存

試劑三

液體7mL×1

2-8℃保存

標準品

液體1mL×1

2-8℃保存

稀釋液

液體20mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1. 試劑二:臨用前取1瓶試劑二加入14mL 蒸餾水,此試劑較難溶,可以 70℃加熱并劇烈振蕩以促進溶解,或者通過超聲處理以促進溶解。每次用前需檢查是否有粉劑析出。用不完的試劑可在2-8℃中保存一個月。

2. 標準品:為1000nmol/mL的標準溶液。

產品說明:

脂質過氧化物(lipid hydroperoxide LPO)是不飽和脂肪酸鏈經自由基或活性氧作用后產生的過氧化物。病理情況下,脂質過氧化反應增強可導致原本低含量的LPO升高LPO含量升高會對細胞的結構和功能造成損傷,LPO含量與機體免疫系統和衰老密切相關。

LPO在酸性條件下加熱產生丙二醛(MDA),MDA與硫代巴*妥酸(Thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成棕紅色物質三甲川(3,5,5-三甲基惡唑-2,4-二*),其最大吸收波長在 532nm,進行比色后可估測樣本中LPO的含量。

 


注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

1、組織:按照樣本質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測。

2、細菌或細胞樣本:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清,按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬細菌或細胞加入 1mL 提取液)加入提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率200W,超聲 3s,間隔 7s,總時間3min),8000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測。

3、培養液或其他液體:直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進行測定。

二、測定步驟

1、可見分光光度計預熱30min以上,調節波長至532600nm,用蒸餾水調零。

2、標準溶液的制備:現標準液為1000nmol/mLMDA標準溶液,將標準液用稀釋液稀釋至20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625 nmol/mL備用,具體稀釋可參考下表。

序號

稀釋前濃度(nmol/mL

標準液體積(µL

稀釋液體積(µL

稀釋后濃度(nmol/mL

1

1000

40

960

40

2

40

500

500

20

3

20

500

500

10

4

10

500

500

5

5

5

500

500

2.5

6

2.5

500

500

1.25

7

1.25

500

500

0.625

8

0.625

500

500

0.3125

9

0.3125

500

500

0.15625

備注:實驗中每個標準管需400µL標準溶液。

3、在EP管中按下表步驟加樣:

試劑名稱

測定管

對照管

標準管

空白管

樣本(μL

400

-

-

-

蒸餾水(μL

-

400

-

-

標準液(μL

-

-

400

-

稀釋液(μL

-

-

-

400

試劑一(μL

300

300

300

300

試劑二(μL

200

200

200

200

試劑三(μL

100

100

100

100

     將混合液在 45℃植物樣本)或100℃其他樣本)水浴60min 后(標準管在兩個溫度水浴均可),置于冰浴中冷卻,8000g,常溫,離心 10min。吸取 900μL 上清液于1mL玻璃比色皿中,測定各樣本在 532nm600nm處的吸光度。分別計算 ΔA=A532測定-A532對照-A600測定-A600對照),ΔA標準=A532標準-A532空白- (A600標準-A600空白)(標準曲線,空白管和對照管只需做 1-2 次)。

二、LPO含量的計算

1. 根據標準管的濃度(x,nmol/mL)和吸光度ΔA標準(y,ΔA標準),建立標準曲線。根據標準曲線,將ΔAy,ΔA)代入公式計算樣本濃度(x,nmol/mL

2. 按樣本蛋白質濃度計算

LPO含量(nmol/mg prot=x×V÷Cpr×V樣)= x÷Cpr

3. 按樣本質量計算

LPO含量(nmol/g 質量)=x×V÷W×V÷V樣總)= x÷W

4. 按細菌/細胞數量計算

LPO含量(nmol/104cell= x×V÷V÷V樣總×細胞數量(萬個))= x÷細胞數量(萬個)

5. 按照液體樣本體積計算

LPO含量(nmol/mL= x

V樣:加入樣本體積,0.4mL,V樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g

注意事項:

1. 待測液如果有密集小氣泡,建議靜置20min左右等待氣泡消失再測,以免影響測定結果,如果有少量氣泡可以通過低速離心或輕磕等方式來消除。

2. 待測液如果尚未澄清,可吸取上清液后再次離心。

3. 為防止水浴60min過程中水分散失,建議使用螺旋管或用封口膜給EP管纏口。

4. 如果用高溫助溶試劑二,需要待其冷卻至室溫后再使用。

5. 如果測定吸光值過低或接近空白,適當延長反應時間或加大樣本量后,重新測定。如果吸光值過大或超過檢測范圍(A5321.5或者ΔA1.5),建議將樣本適當稀釋后進行測定。注意同步修改計算公式。

實驗實例:

1. 稱取0.1192 g綠蘿葉片,按照測定步驟操作,測得計算A532測定= 0.143,A532對照= 0.005,A600測定= 0.023,A600對照 = 0.004?A=0.119,將?A代入標曲公式y =0.0289x + 0.0032R2=0.9993,計算得x=4.007,按樣本質量計算得:
LPO含量(nmol/g 質量)= x÷W = 33.616 nmol/g 質量。

2. 稱取0.1209g大鼠心臟,按照測定步驟操作,測得計算A532測定= 0.122A532對照= 0.008A600測定=0.051A600對照= 0.003?A=0.066,將?A代入標曲公式y =0.0838x + 0.0045R2=0.9989,得出x=0.734,按樣本質量計算得:
LPO含量(nmol/g 質量)= x÷W = 6.071 nmol/g 質量。

參考文獻:

Hiroshi Ohkawa, Nobuko Ohishi, Kunio Yagi,Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction[J],Analytical Biochemistry,1979.

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