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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5165-100T/48S超氧化物歧化酶活性檢測試劑盒 微量法

超氧化物歧化酶活性檢測試劑盒 微量法
  • 超氧化物歧化酶活性檢測試劑盒 微量法
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC5165-100T/48S
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-07-08 14:55:53瀏覽次數(shù):559評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T/24S
貨號 BC5160 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合
主要用途 超氧化物歧化酶活性檢測
超氧化物歧化酶活性檢測試劑盒 微量法
有效期
6個月
儲存條件
2-8℃
單位

英文名稱
Superoxide Dismutase(SOD)Activity Assay Kit (WST-1 Method)
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規(guī)格
100T/48S

超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒(WST-1法)說明書

微量法

注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號:BC5165

規(guī)格:100T/48S

產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規(guī)格

保存條件

提取液

液體 60 mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體5 mL×1

2-8℃保存

試劑二

液體25 μL×1

2-8℃保存

試劑三

液體4 mL×1

2-8℃保存

試劑四

液體0.12 mL×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 試劑二:使用前先使用掌上離心機離心至管底再吹打混勻;

2、 試劑二工作液:根據(jù)樣本數(shù)量按試劑二:蒸餾水=5μL245μL(共250μL,約12S)的比例配制試劑二工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配

3、 試劑四工作液:根據(jù)樣本量按試劑四蒸餾水=20μL180μL(共200μL,約20T)的比例配制試劑四工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明:

SODEC 1.15.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,催化超氧化物陰離子發(fā)生化作用,生成H2O2O2SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。

通過黃*呤及黃*呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)O2-可與WST-1反應(yīng)生成水溶性黃色甲臜,后者在450nm處有吸收峰;SOD可清除O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應(yīng)液黃色越深,說明SOD活性愈低,反之活性越高。

注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、電子天平、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

1. 細菌或培養(yǎng)細胞樣本:收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL=500-1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液)超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2. 組織樣本:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5-10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進行冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

3. 血清(漿)樣本:直接檢測,若有渾濁可離心后取上清進行測定。

二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。

2. 測定前將試劑一、試劑三和試劑四工作液37℃水浴5min以上。

3. 加樣表(按順序在EP管或96孔板中加入下列試劑)

試劑名稱(μL

測定管

對照管

空白管1

空白管2

20

20

-

-

試劑一

45

45

45

45

試劑二工作液

20

-

20

-

試劑三

35

35

35

35

蒸餾水

70

90

90

110

試劑四工作液

10

10

10

10

充分混勻,37℃水浴30min后,450nm處測定各管吸光值A。分別記為A測定、A對照、A1空白A2空白,計算ΔA測定=A測定-A對照,ΔA空白=A1空白-A2空白。(空白管1和空白管2各只需做1~2管;每個樣本有一個對照管)

三、SOD活性計算

1、抑制百分率的計算

抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%

盡量使樣本的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi),越靠近50%越準確。如果計算出來的抑制百分率小于30%或大于70%,則通常需要調(diào)整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高,則需適當稀釋樣本;如果測定出來的抑制百分率偏低,則需重新準備濃度比較高的待測樣本或者提高加樣表中的樣本量,但需相應(yīng)減少測定管和對照管中蒸餾水的體積。

2SOD酶活性單位:在上述黃*呤氧化酶偶聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50%時,反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位。

3SOD酶活性計算:

1)血清(漿)SOD活性(U/mL=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總] ÷V×F

=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×F

2)組織、細菌或培養(yǎng)細胞SOD活力計算:

a.按樣本蛋白濃度計算

SOD活性(U/mg prot=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總] ÷(V×Cpr)×F

=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷Cpr×F

b.按樣本質(zhì)量計算

SOD活性(U/g 質(zhì)量)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總] ÷(W×V÷V樣總)×F

=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F

c.按細菌或細胞數(shù)量計算

SOD 活力(U/104 cell=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總] ÷(N×V÷V樣總)×F

=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷N×F

V反總:反應(yīng)總體積,0.2mLV樣:加入反應(yīng)體系中的樣本體積,0.02mLV樣總:加入提取液體積1mLCpr:蛋白樣本濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,gN:細胞或細菌總數(shù),以104計;F:樣本稀釋倍數(shù)。

注意事項:

1、 樣本和試劑二工作液使用時在冰上放置

2、 樣本較多時,可按表格配制測定管工作液和對照管工作液(包含試劑一、(試劑二工作液)、試劑三、蒸餾水),試劑四工作液必須最后加入。

實驗實例:

1、 0.1g大鼠肝臟加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清稀釋50倍,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.419-0.047=0.372ΔA空白=A1空白-A2空白=0.752-0.045=0.707抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%=47.38%,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

SOD活性(U/g 質(zhì)量)=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F =4502.09 U/g 質(zhì)量。

2、 0.1g綠蘿葉片加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清稀釋3倍,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.417-0.108=0.309ΔA空白=A1空白-A2空白=0.752-0.045=0.707抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%=56.29%,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

SOD活性(U/g 質(zhì)量)=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×F =386.34 U/g 質(zhì)量。

3、 450×104Hela細胞,加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清按照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.417-0.053=0.364ΔA空白=A1空白-A2空白=0.752-0.045=0.707抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%=48.51%,按細胞數(shù)量計算酶活得:

SOD活性(U/104 cell=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷N×F =0.021 U/104 cell

4、 50μL人血清按照測定步驟操作(同時減少加樣表中蒸餾水體積),用96孔板測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.889-0.418=0.471ΔA空白=A1空白-A2空白=0.752-0.045=0.707抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%=33.38%按血清(漿)體積計算酶活得:

血清(漿)SOD活性(U/mL=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總] ÷V×F =2.004 U/mL

參考文獻:

[1] Peskin A V, Winterbourn C C. A microtiter plate assay for superoxide dismutase using a water-soluble tetrazolium salt (WST-1) [J]. Clinica chimica acta, 2000, 293(1-2):157-166.

[2] Hou Z, Zhao L, Wang Y, et al. Purification and characterization of superoxide dismutases from sea buckthorn and chestnut rose[J]. Journal of food science, 2019, 84(4): 746-753.

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