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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC1615-100T/96S木質素過氧化物酶活性檢測試劑盒 微量法

木質素過氧化物酶活性檢測試劑盒 微量法
  • 木質素過氧化物酶活性檢測試劑盒 微量法
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC1615-100T/96S
  • 廠商性質 生產商
  • 產品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-07-08 18:23:55瀏覽次數:726評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現貨 規格 100T/96S
貨號 BC1615 應用領域 環保,化工,生物產業,農業,綜合
主要用途 木質素過氧化物酶活性檢測
木質素過氧化物酶活性檢測試劑盒 微量法
儲存條件
2-8℃
有效期
6個月
單位

推薦
若使用96孔板測定,需使用96孔UV板,推薦貨號YA0602
英文名稱
Lignin peroxidase (Lip) Activity Assay Kit
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規格
100T/96S

木質素過氧化物酶(Lip)活性檢測試劑盒說明書

微量法

注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號:BC1615

規格:100T/96S

產品內容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

試劑名稱

規格

保存條件

試劑一

液體115mL×1瓶

2-8℃保存

試劑二

液體5mL×1瓶

2-8℃保存

試劑三

液體3mL×1瓶

2-8℃保存

產品說明:

木質素過氧化物酶(EC1.11.1.14)(Lip)是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶,是木質素的生物降解過程中的主要木質素降解酶類。Lip在飼料資源開發以及廢水、廢物處理領域有著廣闊的應用前景。

藜蘆醇可以被Lip催化發生氧化反應,其產物藜蘆醛在310nm處有最大吸收峰,以藜蘆醇為反應底物,通過測定310nm處藜蘆醛的吸光值,可以判定Lip的酶活性。

注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、可調式移液器、超聲波細胞破碎儀、研缽/勻漿器、微量石英比色皿/96孔(UV板)、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

1、組織:按照樣本質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)加入試劑一,冰浴勻漿;10000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測。

2、細菌或細胞樣本:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清,按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一)加入試劑一,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率300W,超聲 3s,間隔 7s,總時間3min),10000g 4℃離心10min,取上清置冰上待測。

3、培養液或其他液體:直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進行測定。

二、測定步驟

1、紫外分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調節波長至310nm,蒸餾水調零。

2、測定前根據實驗用量取出部分試劑一、試劑二、試劑三置于37℃預熱10min以上。若一次性測定樣本過多,可根據使用量將試劑一、二、三按6:2:1比例配成工作液后進行預熱,測定時按照20μL樣本+180μL工作液加入微量石英比色皿/96孔(UV板)進行測定。

3、加樣表(在微量石英比色皿/96孔(UV板)中依次加入下列試劑)

 

試劑名稱(μL

測定管

試劑一(μL

120

試劑二(μL

40

樣本(μL

20

試劑三(μL

20

     將上述試劑分別加入微量石英比色皿/96孔(UV板)后迅速吹打混勻,從加完最后一個試劑開始計時,記錄第15s的吸光值A1,將混合液置于37℃水浴鍋/恒溫培養箱培養5min(培養箱有控溫功能的可以將溫度調至37℃),取出測定5min15s時的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1,注意保證測定時間的準確性。

三、Lip活力的計算

A.用微量石英比色皿測定的計算公式如下:

1.按樣本蛋白質濃度計算

酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每mg組織蛋白每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。

Lip活性(U/mg prot= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V×Cpr)÷T=215.05×ΔA÷Cpr

2.按樣本質量計算

酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每g組織每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。

Lip活性(U/g 質量)= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×W)÷T=215.05×ΔA÷W

3.按細菌/細胞數量計算

酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每104細菌/細胞每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。

Lip活性(U/104 cell= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×細胞數量)÷T=215.05×ΔA÷細胞數量

4. 按照樣本體積計算

酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每mL血清或液體樣本每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需酶量為一個酶活單位。

Lip活性(U/mL=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V÷T=215.05×ΔA

ε:藜蘆醛摩爾消光系數:9300L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應總體積,2×10-4L;V樣:加入樣本體積,0.02mL,V樣總:提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,5 min109:單位換算系數,1mol=109nmol。

B.96UV板測定的計算公式如下:

1. 按樣本蛋白質濃度計算

酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每mg組織蛋白每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。

Lip活性(U/mg prot= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V×Cpr)÷T=358.42×ΔA÷Cpr

2. 按樣本質量計算

酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每g組織每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。

Lip活性(U/g 質量)= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×W)÷T=358.42×ΔA÷W

3. 按細菌/細胞數量計算

酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每104細菌/細胞每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需的酶量為一個酶活單位。

Lip活性(U/104 cell)= ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V÷V樣總×細胞數量)÷T=358.42×ΔA÷細胞數量

4. 按照樣本體積計算

酶活定義:37℃,pH4.5條件下,每mL血清或液體樣本每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需酶量為一個酶活單位。

Lip活性(U/mL)=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V÷T=358.42×ΔA

 

ε:藜蘆醛摩爾消光系數:9300L/mol/cm;d:比色皿光徑,0.6cm;V反總:反應總體積,2×10-4L;V樣:加入樣本體積,0.02mL,V樣總:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g;T:反應時間,5 min;109:單位換算系數,1mol=109nmol。

實驗實例:

取0.1125g杏鮑菇加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清置冰上,之后按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測得計算A1=0.2294,A2=0.5322,ΔA=A2-A1=0.3028,按樣本質量計算酶活得:

Lip 活性(U/g 質量)=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V÷T=142.09 U/g 質量。

參考文獻:

[1] Konadu K T, Harrison S, Osseo-Asare K, et al. Transformation of the carbonaceous matter in double refractory gold ore by crude lignin peroxidase released from the white-rot fungus[J]. International Biodeterioration & Biodegradation, 2019, 143(1996):104735.

[2] Ahmed A A Q, Mckay T J M. Potential of Bacillus sp. LG7 as a Promising Source of Ligninolytic Enzymes for Industrial and Biotechnological Applications[J]. Proceedings of the National Academy of ences India, 2017.

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