目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>脂肪酸代謝系列>> BC2440-50T/24S脂蛋白酯酶(LPL)檢測試劑盒 脂肪酸代謝
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/24S |
貨號 | BC2440 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
主要用途 | 脂蛋白酯酶(LPL)檢測 |
脂蛋白酯酶(LPL)活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號:BC2440
規格:50T/24S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
試劑二:臨用前取1支加入1.5 mL丙 酮溶解備用,用不完的試劑-20℃保存4周;
標準品:5 μmol/mL對硝基 *酚標準溶液。臨用前取30μL 5μmol/mL標準液,加入450μL試劑一充分混勻,配制成0.3125μmol/mL標準液使用,現用現配(實驗中每管需要100μL,為減小實驗誤差,故配制大體積)。
產品說明:
脂蛋白酯酶(Lipoproteinlipase,LPL)是甘油三酯降解的降速酶,可催化甘油三酯水解為脂肪酸和單酸甘油酯,主要在肝臟實質細胞中合成,在脂質代謝和轉運中發揮重要作用。
脂蛋白酯酶水解4-硝基 苯棕櫚酸酯產生4-硝基*酚,在400nm有特征吸收峰。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、低溫臺式離心機、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、EP管、冰、丙 酮和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
1、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣本:直接檢測。
二、測定步驟
分光光度計預熱30min以上,調節波長至400nm,蒸餾水調零。
操作表:在1.5mL EP管中進行下列操作:
樣本名稱 | 對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本(μL) | 100 | 100 | - | - |
標準管(μL) | - | - | 100 | - |
蒸餾水(μL) | - | - | - | 100 |
試劑一(μL) | 400 | 360 | 400 | 400 |
試劑二(μL) | - | 40 | - | - |
混勻,45℃水浴10min | - | - | ||
試劑三(μL) | 500 | 500 | 500 | 500 |
充分混勻放置2min后,對照管和測定管8000g常溫離心10min,取上清、標準管和空白管于1mL玻璃比色皿中測定400nm處吸光值,記為A對照管、A測定管、A空白管、A標準管,ΔA=A測定管- A對照管,ΔA標準=A標準管-A空白管。空白管和標準管只需做1-2次。 |
三、LPL活性計算
1、血清(漿)LPL活力計算
單位定義:在45℃,pH7.5條件下,每毫升血清每分鐘水解產生1nmol 4-硝基 *酚為一個酶活力單位。
LPL(U/mL)=ΔA÷(ΔA標準÷C標準)÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標準
2、組織、細菌或細胞中LPL活力計算
(1)按樣本質量計算
單位定義:在45℃,pH7.5條件下,每克組織每分鐘水解產生1nmol 4-硝基*酚為一個酶活力單位。
LPL(U/g 質量)=ΔA÷(ΔA標準÷C標準)×V提取÷W÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標準÷W
(2)按樣本蛋白濃度計算
單位定義:在45℃,pH7.5條件下,每毫克蛋白每分鐘水解產生1nmol 4-硝基*酚為一個酶活力單位。
LPL(U/mg prot)=ΔA÷(ΔA標準÷C標準)×V提取÷(V提取×Cpr)÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標準÷Cpr
(3)按細菌或細胞數量計算:
單位定義:在45℃,pH7.5條件下,每104個細胞每分鐘水解產生1nmol 4-硝*酚為一個酶活力單位。
LPL(U/104 cell)=ΔA÷(ΔA標準÷C標準)×V提取÷N÷T×1000=31.25×ΔA÷ΔA標準÷N
C標準:標準溶液濃度,0.3125μmol/mL;V提?。杭尤朐噭┮惑w積,1mL;T:反應時間,10min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;N:細菌或細胞總數,以萬計;1000:單位換算系數,1μmol=1000nmol。
注意事項:
測定管加入試劑二后混變渾濁為正常現象。
若A大于1,將粗酶液用試劑一稀釋后再進行測定。
實驗實例:
取0.1g大鼠肌肉加入1mL試劑一,取上清后按照測定步驟操作,測得計算ΔA=A測定管- A對照管=0.697-0.160=0.537,ΔA標準=A標準管-A空白管=0.545-0.001=0.544,按樣本質量計算酶活得:LPL(U/g 質量)= 31.25×ΔA÷ΔA標準÷W=31.25×0.537÷0.544÷0.1=308.48 U/g 質量。
取兔血清稀釋2倍后按照測定步驟操作,測得計算ΔA=A測定管- A對照管=0.639-0.096=0.543,ΔA標準=A標準管-A空白管=0.545-0.001=0.544,按血清(漿)體積計算酶活得:LPL(U/mL)= 31.25×ΔA÷ΔA標準×2(稀釋倍數)=31.25×0.543÷0.544×2(稀釋倍數)=62.39 U/mL。
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