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CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100T/96S |
貨號 | BC0695 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
主要用途 | 葡萄糖氧化酶酶活測定 |
葡萄糖氧化酶(GOD)測試盒
微量法
貨號:BC0695
規格:100T/96S
產品內容:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 15mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 3mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:液體 1mL×1 支,-20℃保存,融化后可分裝保存。
產品說明:
GOD(EC 1.1.3.4)廣泛存在于動物和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并產生 H 2 O 2 ,是生物體中產生活性氧的代謝途徑之一。
GOD 催化葡萄糖產生 H 2 O 2 ,過氧化物酶在有氧存在時催化 H 2 O 2 分解產生的氧又將鄰聯茴香胺氧化生成有色物質,顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關系。
需自備設備跟儀器
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水
操作步驟
一、 樣品測定的準備
1、組織處理:稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿;8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿):直接檢測。
二、 測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節波長 500nm,蒸餾水調零。
2、GOD 工作液的配制:取 15mL 試劑一加 3mL 試劑二混勻,調 PH 5.1(現配現用)。
3、加樣表:
試劑名稱(μL) 測定管
GOD 工作液 174
試劑三 6
混勻,37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 5min
樣本 20
樣品測定前將 GOD 工作液與試劑三放入 37℃水浴中保溫,然后將上述試劑按順序加入微量比
色皿/96 孔板中,加樣本的同時開始計時;在 500 nm 波長下記錄 20 秒時的初始吸光度 A1 及 1 分20 秒時的吸光度 A2。計算 ΔA=A2-A1。
三、GOD 活力單位的計算
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、動物組織 GOD 活力的計算
(1)按蛋白濃度計算
單位的定義 :每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T=1333×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每 g 組織在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD(U/g 鮮重)=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=1333×ΔA÷W
2、血清(漿)GOD 活力的計算
單位的定義 :每 mL 血清(漿)在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD(U/mL)=ΔA÷d÷ε×V 反總÷T÷V 樣本=1333×ΔA
V 反總:反應總體積,0.2mL;V 樣本:加入樣本體積,0.02mL;V 提取,加入提取液體積,
1mL;cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;d:光徑,1cm;ε:氧化型鄰聯茴香胺消光系數,7.5×10 -3 mL/μmol/cm;T:反應時間,1min。
b.用 用 96 孔板測定的計算公式如下
1、動物組織 GOD 活力的計算
(1)按蛋白濃度計算
單位的定義 :每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T=2222×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每 g 組織在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD(U/g 鮮重)=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=2222×ΔA÷W
2、血清(漿)GOD 活力的計算
單位的定義 :每 mL 血清(漿)在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。
GOD(U/mL)=ΔA÷d÷ε×V 反總÷T÷V 樣本=2222×ΔA
V 反總:反應總體積,0.2mL;V 樣本:加入樣本體積,0.02mL;cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;
W:樣本鮮重,g;d:光徑,0.6cm;ε:氧化型鄰聯茴香胺消光系數,7.5×10 -3 mL/μmol/cm;T:反應時間,1min。
1、不同勻漿組織中 GOD 活力不一樣,做正式試驗之前請做 1-2 只預試,若 A2-A1>1,
則說明組織活力太高,必須用提取液稀釋成適當濃度勻漿上清液,使 A2-A1<1,
以提高檢測靈敏度。
實驗過程中若出現 A1> A2 現象請將樣本用提取液稀釋成適當濃度.
2、好兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結果的準確性。
3、此試劑盒僅適用于動物組織和動物血清(漿)。
葡萄糖氧化酶(GOD)測試盒 微量法 葡萄糖氧化酶(GOD)測試盒 微量法