目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC3295結(jié)合態(tài)淀粉合成酶活性檢測試劑盒 微量法
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
---|---|---|---|
分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣 |
貨號 | BC3295 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,食品,化工,農(nóng)業(yè),制藥 |
主要用途 | 結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)活性檢測 |
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶活性檢測試劑盒 微量法
注意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
貨號:BC3295
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:30mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;
試劑四:粉劑×2瓶,4℃保存;臨用前加入5mL試劑一充分混勻備用;
試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入10mL試劑一充分混勻備用;
試劑六:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前加入500μL雙蒸水,充分溶解備用;
試劑七:液體250μL×2支,-20℃保存;
試劑八:液體12.5μL×2支;每支臨用前加入溶解好的4mL試劑四。
反應(yīng)液Ⅰ的配制:臨用前在試劑二中加入14mL試劑一,緩慢加熱,逐漸升溫使其溶解,冷卻后將其加入試劑三混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測定。
產(chǎn)品說明:
GBSS(EC 2.4.1.21)以束縛態(tài)存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長反應(yīng),主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。
GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時生成ADP;進(jìn)一步通過反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比,通過340nm下測定NADPH的增加量,可以計算GBSS活性。
需自備的的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、粗酶液制備
稱取約0.1g組織加入1mL提取液,冰浴中勻漿。10000g ,4℃離心10min,棄上清,在沉淀中加入1mL提取液充分混勻,置冰上待測。
二、測定步驟
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、在EP管中按順序加入下列試劑
試劑名稱(μL) | 測定管 |
樣本 | 100 |
反應(yīng)液Ⅰ | 135 |
混勻,30℃保溫20 min,置沸水浴中1 min(蓋緊,防止水分散失),冰浴冷卻 | |
試劑八 | 75 |
混勻,30℃保溫30 min,置沸水浴中1 min(蓋緊,防止水分散失),冰浴冷卻,10000g 常溫離心10min,取上清液(如果一次性測定樣本較多,可以將試劑四、五和六按比例配成混合液) | |
上清液 | 150 |
試劑五 | 100 |
試劑六 | 5 |
試劑七 | 5 |
混勻后立即轉(zhuǎn)移200μL微量石英比色皿或96孔板中, 340 nm波長下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2,計算ΔA=A2-A1。
注意:試劑二如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混勻。
三、GBSS活性計算
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下:
1、按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白在1mL反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
GBSS活性(U/mg prot)= [ΔA÷(ε×d)×V測]÷(Cpr×V樣÷V反總×V上清) ÷T=432×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
2、按照樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織在1mL反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
GBSS活性(U/g 鮮重)=[ΔA÷(ε×d)×V測×109]÷(W÷V提取×V樣÷V反總×V上清) ÷T= 432×ΔA÷W 。
V測:測量體積,0.26m L;V樣:加入樣本體積,0.1m L;V反總:反應(yīng)體積,0.31mL;V上清:加入上清液體積,0.15mL;V提取:加入提取液體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×10-3mL/nmoL/cm;d:比色皿光徑,1cm;T:反應(yīng)時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g。
b.使用96孔板測定的計算公式如下:
1、按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
GBSS活性(U/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×V測]÷(Cpr×V樣÷V反總×V上清) ÷T =720×ΔA÷Cpr。
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
2、按照樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
GBSS活性(U/g 鮮重)=[ΔA÷(ε×d)×V測]÷(W÷V提取×V樣÷V反總×V上清) ÷T=720×ΔA÷W。
V測:測量體積,0.26m L;V樣:加入樣本體積,0.1m L;V反總:反應(yīng)體積,0.31mL;V上清:加入上清液體積,0.15mL;V提取:加入提取液體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×10-3mL/nmoL/cm;d:比色皿光徑,1cm;T:反應(yīng)時間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g。
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶活性檢測試劑盒 微量法訂購說明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn)。
4、每日訂單截止時間為16點整,部分城市可到17點整,因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后,將底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
運輸說明:
極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護(hù)航。
低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴(yán)實密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實驗保駕護(hù)航。
常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。
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