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上海研謹生物科技有限公司

Trizol

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所在地上海市

更新時間:2018-11-15 16:14:32瀏覽次數:3320次

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供貨周期 一周
Trizol 適用于從各種組織或細胞中快速分離總 RNA,既可用于小量樣品(50~
100 mg 組織、5×10 細胞),也可用于大量樣品(>1g 組織/>10 細胞)。

貨號

產品名稱

英文名稱

CAS號

產品特征

R21086-100ml

Trizol(總RNA提取試劑)

 

 

 

Js30876-100ml

一步法總RNA提取試劑

Trizol Reagent

 

BR

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

介:

Trizol(RNA 提取試劑)

 

Trizol 是一新型的用于胞或組織RNA提取試劑Trizol采用不

Invitrogen TRIzol相似的原理和方法,其色、抽提的方法和步驟不后者*相同。

Trizol 含酚和異硫酸胍等物,能迅速裂解胞或組織活核酸,保持

RNA 的完整性。加入仿并離心后,溶液形成上清層為水相(無色)、中間層、下層為有機()。上清用異丙醇沉淀回收RNA,中間層用乙醇沉淀回收 DNA,下用異丙醇沉淀回收蛋白。

Trizol 適用于從各種組織胞中快速分離RNA,既可用于小量(50

100 mg 組織5×10 ),也可用于大量(>1g 組織/>10)。提取的RNA

量高,可用于 North6ern blotDot blotpolyA 篩選、體外翻RNase 分析和分子克隆。本品具有以下特點:適用范廣;操作簡單,整個1 內完成;

度高;染少。

 

成:

Trizol Reagent

100ml 4 避光

 

材料:

1試劑:無水乙醇、氯防仿、異丙醇、DEPC理水等。

2、耗材:RNase 廣泛存在于人的皮上和體液及境中,RNase  RNA降解的主要物,非常定。操作時應佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金屬物品、 實驗儀器等清除 RNase,移液器吸EP 管等制品的 RNase free理尤重要。

3器:低溫高速離心機、低溫冰箱。

操作步驟(供參考)

1品準

胞:

直接裂解:直接在培/皿中加入 Trizol 裂解胞,10cm 1ml Trizol,用移液器吹打混勻。 2

胰蛋白消化:用無菌  PBS 滌細胞后,加入含有  0.050.25%胰蛋白 PBS 胞,當胞脫離容器壁后,加入含有血清的培止反,將胞溶液移至無RNase 的離心管中,50006000g 離心 5 min,收集胞沉淀,去除上清。收集一定要將胞培液去除干,否裂解*,降低 RNA率。

胞:無需清洗胞,直接 50006000 g 離心 5 min,收集胞。5×10 10

7 6 7

 

10 -701ml Tr5i0zo1l00mg 組織在液氮中充分研

磨或者加入  1ml Trizol 研磨或者用勻漿器勻漿處理。品體一般 Trizol

10%。研磨要迅速,以 1min佳。

血液:取 0.51 ml 存的血液,12000g 離心 5 min,去除血漿,加入 1ml Trizol, 充分振混勻。

2、核酸分離:充分振混勻(可以置于低溫/超低溫冰箱 510 min 后,充分振,反

13 ),將裂解品或勻漿液室溫放置 510 min,使核蛋白不核酸*分離。

3品分:加入 0.2 ml 仿/1ml Trizol烈振15s,室溫放置 23 min。置于 4離心機,12000 g 離心 1015 min。上層為水相,中間層和下層為有機相,RNA在上水相。

4、沉淀 RNA:吸取上水相(約  500μl)移至無 RNase 的離心管中(要吸取任何中間層,會有染色體DNA),加入等體異丙醇混勻(或者加入1.2倍體Trizol與用  RNA沉淀液,超低溫冰箱放置 23hr,可以大大提高 RNA回收率),室溫 1520 min12000g 4離心 10min,離心后管或管底形成膠狀沉淀,棄上清。

5、洗RNA:加入 1ml DEPC水配制的 75%乙醇/1ml Trizol沉淀(或者加入1ml

Trizol與用RNA液,可以大大提高RNA度),室溫放置510min7500g 4離心5 min,棄上清。室溫干燥510min分干燥,否RNA以溶解。

6、溶解 RNA:加入3050ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA-70期保存或直接用于后續試驗于肝、胰腺、組織 RNase 含量高的品,沉淀100%去離子甲胺溶解。

 

分析與定量:

1品在 260nm 280nm的吸收確定  RNA 量。按  1OD=40pg RNA

RNA率。OD260/280  1.82.0 視為抽提  RNA 好。度在 4μg/ml品適于用分光光度計測定。

2行甲醛變脂糖泳,確定RNA的完整性和染情況。

3、核酸分析儀測RNA量和度。

 

 

注意事

1品保存:加入 Trizol 混勻后,品可在-70放置 12 月;RNA 品可以在 70%酒精中-70保存 24 周:如果需要期保存,置于超低溫冰箱中保存。

2Trizol性物染皮或眼睛后,立即用清水或生理水沖洗,必要時尋醫生的幫助。

3Trizol 可常溫運,建保存 4保存。

4了您的安全和健康,穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

有效期:12 個月有效。

 

見問題分析:

見問題 可能原因

抽提得到的RNA沉淀未*溶解。

水相中混有有機相,從而存在蛋白DNA染。

A260/ A2801.6 RNA品用水而TE溶解。低離子度和低 pH 條件下,A280會偏高品勻漿時加的  Trizol 試劑太少,RNA 不蛋白DNA未能*分離。

漿品未在室溫放置或者放置時間太短,RNA不核蛋白未*解離。

品中含組織(如乙醇等)或堿性溶液,致水相減少或 pH升高。

 

DNA

品勻漿時加入的試劑太少。如果存在 DNA染,可用 DNA清除去除水相中混有有機相,從而存在蛋白DNA染。

RNA 量低

RNA 降解

蛋白和多糖

品裂解或勻漿處底,RNA沒有被*放出來得到的 RNA沉淀未*溶解。

抽提的RNA中含有 RNase

組織品沒有及被液氮存,組織胞中的 RNA 降解溶液或離心管未 RNase free 理,RNase RNA被降解。

胞在胰蛋白消化時間過長致未加  Trizol RNA部分降解。

使用的甲pH小于 3.5RNA生酸解水相中混有有機相,從而有蛋白 DNA品中蛋白、多糖含量高或品量太大,胞未裂解*。

 

碘代硫代乙酰膽堿

用途: 乙酰膽堿酯酶的底物,煙堿性乙酰膽堿受體激動劑。常用于色度法測定

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