改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液
產品簡介:
蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯合染色簡稱 HE 染色,是病理學和組織學常用的一種染色方法。蘇木精為堿性天然染料,可使細胞核著色。細胞核內染色質的主要成分是DNA,在DNA 的雙螺旋結構中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易不帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。
改良Lillie-Mayer 蘇木素染色液無毒,無氧化膜,細胞核染色質著色深而細微,臨床上常替代Harris 蘇木素染色液。對細胞核染色很清晰,不著染胞質和纖維成分,屬進行性
染色,故染色后可以不用鹽酸乙醇分化,染色時間約 5~8min,如果是充分氧化后可染色 3~
5min。常用于糖原等特染、酶組化和免疫組化等染色后復染細胞核作對照染色,尤其適用 于經過特殊染色后不能經酸處理時對細胞核的復染。在特殊染色中,常不天青石藍B液聯合染色,使細胞核染色后不被后續的酸性染料所褪色。
染色原理:
1、細胞核染色的原理:
蘇木素為堿性天然染料,可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是DNA,在DNA
雙螺旋結構中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA 雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易不帶正電荷的蘇木素堿性染料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。
2、細胞漿染色的原理:
伊紅是一種化學合成的酸性染料,在一定條件下可使細胞漿著色。細胞漿的主要成分是蛋白質,為兩性化合物,細胞漿的染色不染液的 pH 值密切相關。當染色液 pH 值在胞漿蛋白質等電點(4.7~5.0)以下時,胞漿蛋白質以堿式電離,則細胞漿帶正電荷,就可 被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子,不胞漿蛋白質帶正
電荷的陽離子結合,使細胞漿著色,呈現紅色。
3、分化作用:
染色后,用某些特定的溶液將組織過多結合的染色劑脫去,這個過程稱為分化作用,所 用的溶液稱為分化液。在HE 染色中常用1%鹽酸乙醇作為分化液,因酸能破壞蘇木素的醌型結構,使組織不色素分離而退色。大多數組織經蘇木素染色后,必須用 1%鹽酸乙醇分化,使細胞核過多結合的蘇木素染料和細胞漿吸附的蘇木素染料脫去,再進行伊
紅染色,才能保證細胞核不細胞漿染色的分明。
4、返藍作用:
分化之后,蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態,呈紅色;在堿性條件下處于藍色
離子狀態,呈藍色。組織切片經酸性乙醇分化后呈紅色或粉紅色,立即用水除去組織切 片上的酸而中止分化,再用弱堿性水使蘇木素染上的細胞核呈現藍色,這個過程稱為返藍作用或藍化作用。另外用自來水浸洗也可使細胞核返藍,但所需時間較長。
產品組成:改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液 100ml 500ml RT 避 光
自備材料:
1、酸性乙醇分化液
2、藍化液,如稀氨水、碳酸鋰溶液等
3、系列乙醇
4、伊紅染色液
5、4%多聚甲醛
操作步驟(僅供參考):
(一)石蠟切片染色
1、切片脫蠟至水
①□二甲苯作用 2 次,每次 5~10min。
②□(可選)無水乙醇作用 2 次,每次 3~5min。
③□95%的乙醇 3~5min
④□90%的乙醇 3~5min
⑤□80%的乙醇 3~5min
⑥□自來水或蒸餾水沖洗 1~3min
2、染色
①改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液染色 5~8min
②自來水或蒸餾水沖洗 5~10s
③(可選)鹽酸乙醇分化 2~5s
④自來水沖洗 20~30s
⑤(可選)藍化液返藍 20~40s
⑥自來水沖洗 30~60s 3~5min
⑦伊紅染色液染色 3~5min
⑧□自來水沖洗 1~5s
2、脫水、透明、封固
①□80%乙醇 10~20s
②□90%乙醇 10~20s
③□95%乙醇作用 2 次,每次 1~2min。
④□無水乙醇作用 2 次,每次 2~3min。
⑤□二甲苯透明 3 次,每次 2~3min。
⑥□中性樹脂封片。
染色結果:細胞核呈藍色;細胞質、肌纖維、膠原纖維等呈深淺不一的紅色;角蛋白、紅細
胞等呈明亮的橙紅色。
(二)冰凍切片染色
1、乙謎醚-乙醇混合固定液 5~10s
2、自來水沖洗 2~5s
3、改良 Lillie-Mayer 蘇木素染色液滴染 1~2min(可加熱至 50℃)。
4、自來水沖洗 2~5s
5、(可選)鹽酸乙醇分化 2~5s
6、自來水沖洗 2~5s
7、(可選)藍化液返藍 2~5s
8、自來水沖洗 5~10s
9、伊紅染色液染色 2~5s
10、自來水沖洗 1~2s
11、80%的乙醇 1~2s
12 、95%的乙醇 1~2s
13、無水乙醇 2~5s
14、苯酚二甲苯(1:3) 2~5s
15、二甲苯透明 3 次,每次 2~5s。
16、中性樹脂封片
染色結果:細胞核呈藍色;細胞質、纖維呈紅色。
(三)細胞染色
1、4%多聚甲醛固定 10~20min。
2、自來水沖洗 2 次,每次 2min。
3、蒸餾水沖洗 2 次,每次 2min。