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南京賽泓瑞生物科技有限公司

Lipofectamine 3000轉染試劑| *!

時間:2014-10-17閱讀:136
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    南京賽泓瑞生物科技有限公司是專業從事生化試劑、分子生物學試劑、實驗耗材研發、銷售、服務為一體的專業性生物科技公司。

  

Lipofectamine 3000轉染試劑|

現在向您隆重介紹一種可處理zui難轉染細胞的通用型試劑。可憑借一種具有以下特性的試劑盒,解放那些您真正關心的生物相關細胞類型:

  • 的性能——zui高的效率,適用于各種難以轉染的以及常見的細胞類型
  • 更高的細胞活性——對細胞作用溫和,毒性低
  • 功能多樣——適用于DNA、RNA和共轉染
  •  

                         

 

 

在難轉染細胞類型中具有廣泛的優良性能 

Lipofectamine® 3000試劑充分利用了我們*的脂質體納米顆粒技術,實現了超高轉染性能和可重復的試驗結果。其可在zui廣泛的難轉染和通用細胞類型(圖1)中獲得非凡的轉染效率,同時提升細胞存活率。



圖1. Lipofectamine® 3000試劑勝過了Lipofectamine® 2000和FuGENE® HD試劑。每一種試劑均用于以96孔形式轉染EK 293、HeLa、LNCaP、HepG2和A549細胞系,并在轉染后48小時分析GFP表達情況。在所有五種細胞系中,Lipofectamine® 3000都表現出了高于Lipofectamine® 2000和FuGENE® HD的GFP轉染效率。

 

  圖2. 蛋白印跡分析顯示了HepG2細胞系中GST-STAT蛋白的表達。使用Lipofectamine® 2000試劑、Lipofectamine® 3000試劑、FuGENE® HD試劑(競爭產品1)和X-tremeGENE® HP試劑(競爭產品2)將GST-STAT質粒,在24孔板內轉染入細胞。在轉染后48小時,收集細胞并進行蛋白印跡分析。β-肌動蛋白轉膜圖代表四種樣品上樣量相等。


更高細胞活性,更低細胞毒性 

在開發Lipofectamine® 3000時,我們對轉染過程的四個步驟進行了優化,同時結合了我們*的脂質體納米顆粒技術。其所具有的超高轉染效率使得我們可以減少試劑劑量,降低處理細胞時的潛在毒性風險。

  圖3. 采用劑量的每種試劑,通過綠色熒光蛋白(GFP)表達載體,以96孔形式轉染HeLa細胞。在轉染后48小時,采用流式細胞儀進行分析,以測定百分比形式的轉染效率以及GFP表達強度。相對于Lipofectamine® 2000試劑和Lipofectamine® LTX試劑,Lipofectamine® 3000試劑表現出了更高的轉染效率和蛋白表達水平。


表1. 在一系列細胞系的測試中,Lipofectamine® 3000試劑獲得了超過Lipofectamine® 2000試劑的轉染效率。

  • 細胞系 #-C
  • 細胞系 D-J
  • 細胞系 K-P
  • 細胞系 R-Z
細胞類型 Lipofectamine® 3000試劑轉染效率 Lipofectamine® 3000相對于 Lipofectamine® 2000試劑蛋白表達水平提高倍數
3T3 4
4T1 2
A431 2
A549 3
ACHN 2
bEnd.3 9
BJ 3
BT-549 4
C2C12 3
C6 5
Caco-2 2
Caki-1 4
CHO-K1 1
CHO-S 1
COLO 205 4
COS-7 4

轉染效率 (%): <30%     30-50%    51-79%    >80% 


增強您的癌癥研究工作 

使用生物相關性的細胞系,可為您的研究課題提供相關性的答案。Lipofectamine® 3000試劑適用于zui廣泛的細胞譜系且兼具較高的轉染效率,使您可以非常靈活地在研究中應用自己選擇的細胞。在一系列提取自不同組織的癌癥細胞中,Lipofectamine® 3000表現出了明顯高于Lipofectamine® 2000試劑等*轉染試劑的轉染性能。采用Lipofectamine® 2000試劑時,僅有25%的選定癌癥細胞系屬于易轉染(轉染效率超過50%)的細胞系,而采用Lipofectamine® 3000試劑時,則有60%的細胞系屬于易轉染細胞系。

表2. 在癌癥細胞系中,Lipofectamine® 3000試劑獲得了超過Lipofectamine® 2000試劑的轉染效率。

癌癥細胞系 Lipofectamine® 3000試劑轉染效率 Lipofectamine® 3000相對于 Lipofectamine® 2000試劑蛋白表達水平提高倍數
Hs 578.T 3
SW480 2
SK-MEL-28 2
4T1 2
RD 4
Saos-2 4
PANC-1 3
NCI-H23 2
BT-549 4
L6 8
SK-OV-3 3
DU 145 2
HCC1937 5
SW620 5
MDA-MB-468 9
NCI-H460 17
Caki-1 4

轉染效率 (%): <30%     30–50%    51–79%    >80%

 

  圖4. 用Lipofectamine® 2000試劑和Lipofectamine® 3000試劑將GFP表達質粒轉染進17種細胞系中,采用24孔形式(以0.5 ?g質粒/孔的規格)和各試劑*的試驗方案。在轉染后48小時,分析GFP表達。每種條件均進行三次重復測試,圖中的數據點為平均轉染效率 + 標準偏差。


改善基因組編輯結果 

開發Lipofectamine® 3000試劑,旨在突破輸送技術的界限,促進生物相關系統內的新技術發展,例如基因組編輯。通過這一新試劑,GeneArt® TAL和CRISPR可以靶向HepG2和U2OS細胞內的AAVS1位點,同時表現出更佳的轉染效率、平均熒光強度和基因組切割效果。這些改進之處有助于zui大限度減少繁重的下游工作,更便于進行干細胞處理,增強轉基因在細胞基因組中的位點特異性插入。

下載應用說明 >



圖5. GeneArt® TAL和CRISPR的切割效率。TAL和CRISPR靶向(A) U2OS和(B) HepG2細胞系中的AAVS1位點。采用GeneArt®基因組切割檢測試劑盒分析切割效率。 



圖6. 使用CRISPR載體時的轉染效率和蛋白表達。該載體含有OFP報告基因,并采用Lipofectamine® 2000或Lipofectamine® 3000轉染試劑轉染到(A) U2OS和(B) HepG2細胞系中。柱狀圖所示為報告基因的表達。圖片所示為相應細胞表達OFP的熒光圖。

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