一、細胞基本屬性 | ||||
細胞名稱 | 人外周血樹突狀細胞(DC細胞) | |||
種屬來源 | 人 | |||
組織來源 | 外周血 | |||
生長特性 | 半貼半懸浮 | |||
細胞形態 | 樹突狀細胞樣 | |||
質量檢測 | CD11c免疫熒光染色為陽性,純度高于 90%,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等 | |||
產品規格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 | |||
培養基 | 人外周血樹突狀細胞專用培養基 | |||
培養條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ | |||
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | |||
消化液 | 0.25% | |||
產品貨期 | 7-8周左右 | |||
運輸方式 | T25培養瓶/ 順豐快遞(包郵) | |||
供應限制 | 于科學研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 | |||
背景介紹 | 人外周血DC細胞采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞、培養過程添加細胞因子誘導而來,人外周血DC細胞分離自外周血,由外周血單核細胞誘導而成的;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。DC細胞,全稱樹突狀細胞(DC),是近年來倍受們關注的專職抗原呈遞細胞(APC),能攝取、加工及呈遞抗原,啟動T細胞介導的免疫反應。由美國學者Steinman于1973年在淋巴結中發現,從脾臟中分離出一類與粒細胞、巨噬細胞和淋巴細胞形態和功都不同的白細胞,因其細胞膜向外伸出,形成與神經細胞軸突相似的膜性樹狀突起,故而命名為樹突狀細胞。未成熟DC具有較強的遷移能力,成熟DC能有效激活初始型T細胞,處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環節。樹突狀細胞(Dendritic cells, DC)是機體功能的專職抗原遞呈細胞,它能高效地攝取、加工處理和遞呈抗原,未成熟DC具有較強的遷移能力,成熟DC能有效激活初始型T細胞,處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環節。 DC的來源有兩條途徑:①髓樣干細胞在GM-CSF的刺激下分化為DC,稱為髓樣DC,也稱DCl,與單核細胞和粒細胞有共同的前體細胞;包括朗格漢斯細胞,間皮(或真皮)DCs以及單核細胞衍生的DCs等,②來源于淋巴樣干細胞,稱為淋巴樣DC或漿細胞樣DC,即DC2,與T細胞和NK細胞有共同的前體細胞。樹突狀細胞(DC)表面具有豐富的抗原遞呈分子、共刺激因子和粘附因子,是功能強大的專職抗原遞呈細胞(APC)。DC自身具有免疫刺激能力,是目前發現的惟一能激活未致敏的初始型T細胞的APC。 | |||
二、細胞培養操作 | ||||
收貨處理 | 取出T25細胞培養瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態 | |||
傳代特征 | 屬于高度分化細胞;屬于不增殖細胞群,建議收到細胞后盡快進行相關實驗 | |||
傳代比例 | 不傳代 | |||
半貼壁半懸浮細胞處理 | 1.收集T25細胞培養瓶中的培養基至50ml離心管中,用吸管吸取PBS,吹洗細胞培養瓶1-2次,收集清洗液;經1200-1500rpm離心3min,棄上清,收集細胞沉淀①; 2.添加0.25%消化液1mL至T25培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml培養基終止消化; 3.用吸管輕輕吹打混勻,收集細胞懸液至離心管中;經1200-1500rpm離心3min,棄上清,收集細胞沉淀②; 4.吸取5ml新鮮培養基,重懸細胞沉淀①、細胞沉淀②,把①、②混勻。 5.用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞,按實驗需求接種于實驗器皿內,然后補充適量新鮮的培養基,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養; 6.待細胞狀態穩定后,用于實驗;可以每2-3天換液一次新鮮的培養基。 | |||
備注:由于實驗所用試劑、操作環境及操作手法的不同,以上方法僅供各實驗室參考 客戶在細胞培養過程中,有任何技術問題可以技術服務電話: 按 2,我們隨時給予解答。 | ||||
三、注意事項 | ||||
重要提醒 | 1.培養基于4℃條件下可保存3-6個月。 2.在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。 3.傳代培養過程中,消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。 4.運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。 | |||
到貨須知 | 1.收到細胞后,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,干冰運輸的細胞檢查干冰是否揮發,細胞是否解凍,若有上述現象發生請及時和我們聯系。 2.靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照),記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。 3.由于運輸的原因,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現象。個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養條件一致,若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題,責任由客戶自行承擔。 | |||
四、售后服務 | ||||
重發標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等,重發; 2.收到細胞未開封,如出現污染狀況,重發; 3.收到細胞3天內,發現污染問題,經核實后,重發; 4.常溫發貨的細胞靜置 2 小時后,絕大多數細胞未存活,經核實后,重發; 5.常溫發貨的細胞靜置 22 小時并且未開封,出現污染,經核實后,重發; 6.細胞活性問題,請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經核實后,重發; 7.視具體情況而定。 | |||
不予重發 | 1.客戶操作造成細胞污染,不重發; 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好,不重發; 3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發; 4.細胞狀態不好,未提供真實清晰的培養前 3 天的細胞狀態照片,不重發; 5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的,不重發; 6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發; 7.視具體情況而定。 |