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技術文章

怎樣選擇液相色譜儀

閱讀:2508          發布時間:2012-8-31

如何選擇液相色譜儀

 
 

  一臺品質優良的液相色譜系統應從以下幾個方面考慮:
  
  一.主要技術指標優異:
  首先是如何看指標。液相色譜儀的指標很多,有泵的、檢測器的、色譜柱等等。我們認為要看主要技術指標,根據國家標準,儀器的主要指標有噪音,漂移,zui小檢測濃度,定性定量重復性等。這些指標都要放在系統,回路里去看,去比較。就是需要把各單元裝置都要聯接好,如接好色譜柱,進樣閥,并且要通上流動相。因為您在分析中也都是聯接好以后才可以進行分析的,而不是單單用個檢測器或是泵的。
  然后在這個基礎上,我們再去比較這些主要指標。

  1.噪音
  是指由儀器的電器元件、溫度波動、電壓的線性脈沖以及其他非溶質作用產生的高頻噪聲和基線的無規則波動。噪音的大小直接關系到儀器的檢測靈敏度,噪音越大,檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好,否則噪音過大將會導致基線不穩,甚至影響分析結果。

  2.zui小檢測濃度(zui小檢測限)
  是反映儀器靈敏度的重要參數。CL=2×Nd×C/H(CL :zui小檢測濃度 Nd:噪音 C:樣品濃度zui小檢測濃度 H:樣品峰高)由上式可見,zui小檢測濃度是和噪音成正比的,噪音越大,zui小檢測濃度就越大,靈敏度就越低。某些廠家回避了這個指標,說明他們不愿在zui小檢測濃度的基礎上去比較噪音。

3.漂移
是指儀器穩定后一段時間內基線漂離原點的距離,通常用來衡量儀器穩定快慢。高品質的儀器能在較短的時間內達到穩定,從而在一定程度上提高了分析效率。                          

4.定性定量重復性
主要是考核儀器穩定性的指標,這對于分析樣品來說是非常重要的。好的儀器其穩定性應該是十分的,這就要求多次進樣保留時間及含量的一致性,這樣做出來的結果才能使人信服。
有的朋友會認為這些指標好像都是檢測器的。對的,但是就前面所說條件是要放在整個回路和系統里去看去比較。例如:泵的脈動會直接影響噪音指標,泵的流量準確度、度指標,以及密封性不好也會影響相關指標。所以要系統地看指標。例如:某些公司在公布的指標中,噪音和漂移指標寫的條件是空池或有的干脆不寫。這個指標只考核了UV檢測器光學和電氣的特性,與實際情況相差甚遠,并沒有考驗泵的壓力脈動,液流回路的阻尼和UV檢測器流通池的性能。所以我們認為從以上的主要指標中可以反應出儀器的一些真實水平。 
二.操作方便:
操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的。操作越簡單,有利于提高分析效率,也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。上海伍豐科學儀器有限公司的WS-100工作站軟件實現了真正的智能化操作。它摒棄了以往工作站軟件只能起到數據處理的理念,在國內推出了集控制與后處理于一身的軟件,在操作使用上給用戶帶來了極大的方便。

三.系統的,整體開發
這里指的是儀器的整體開發,是一個完整的系統。目前市場上有這個現象,說我的泵是進口的,或者是檢測器怎么好,用了什么很多的進口件組裝等等。其實這是個誤區。液相色譜是個復雜的系統,不是整體開發的,各項指標之間、軟件和硬件、硬件和硬件等都不匹配,整體水平不會高到哪里去,而且在售后服務方面對用戶也是不負責任的。
整體開發的主要優點有:各項技術指標統一、儀器各單元的通信協調、能夠建立一個整體的數字化評價系統、體現了企業的科技及開發實力。
國外的儀器生產廠家的產品也是整體開發的,所以能夠保證儀器的整體水平。

四.穩定可靠,故障率低
1、色譜柱的使用說明:  
 
(1)、色譜柱使用前注意事項:
色譜柱的儲存液無特殊說明,均為評價報告所示的流動相。在使用前,一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,應先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出,堵塞色譜柱。

(2)、流動相:
流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純,配流動相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經過0.45μm的濾膜過濾一次則更好,尤其是含鹽的流動相。另外,裝流動相的容器和色譜系統中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。
以常規硅膠為基質的鍵合相填料通常的PH值適用范圍是2.0-8.0,BDS C18適合于堿性化合物,PH值適用范圍為2.0-10.0。當必須要在PH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時,每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗,并*置換掉原來所使用的流動相。

(3)、樣品:
樣品也要盡可能清潔,可選用樣品過濾器或樣品預處理柱(SPE)對樣品進行預處理;若樣品不便處理,要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時,所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。

 2、色譜柱的保存 
 
(1)、反相色譜柱每天實驗后的保養:
使用緩沖液或含鹽的流動相,實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘,洗掉色譜柱中的鹽,再用甲醇沖洗30分鐘。注意:不能用純水沖洗柱子,應該在水中加入10%的甲醇,防止將填料沖塌陷。
(2)、長期保存色譜柱:
如色譜柱要長時間保存,必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中,正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑*或柳硫汞)中,并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫。
 
3、色譜柱的再生 
 
因為色譜柱是消耗品,隨著使用時間或進樣次數的增加,會出現色譜峰高降低,峰寬加大或出現肩峰的現象,一般來說可能是柱效下降。

(1)、反相柱的再生:依次采用20-30倍的色譜柱體積的甲醇:水=10:90 (V/V),乙腈,異丙醇作為流動相沖洗色譜柱,完成后再以相反順序沖洗色譜柱。

(2)、正相柱的再生:依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱,然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。
 
4、色譜柱在使用過程中易出現的問題和解決辦法 
 
色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高,如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加,屬于正常現象。但柱壓在使用過程中突然升高(系統管路堵塞及壓力傳感器故障除外),可能的原因有如下幾點:

(1)、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染;

(2)、色譜柱頭的填料被樣品污染;

(3)、色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑,形成結晶析出;

(4)、流動相PH值過大或過小使固定相結構破壞或溶解。


解決辦法如下:

(1)、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染,可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,或者卸下色譜柱頭,將其放在10%的稀硝酸內超聲清洗10分鐘,后再用純水超聲10分鐘,重新裝入色譜柱。

(2)、如確定色譜柱頭的填料被污染,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔細修復后,重新安裝上柱頭螺絲。

(3)、如確定定是鹽結晶,用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內鹽全部溶解,再換高濃度甲醇。

(4)、如果因PH值使用不當,很難恢復。

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