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探針合成實驗服務

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更新時間:2024-08-30 14:59:59瀏覽次數:2666次

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產地類別 國產 應用領域 醫療衛生,生物產業
[探針合成實驗服務]慢病毒,腺病毒,RNAI類, 分子生物實驗,病理實驗,免疫學實驗,細胞實驗,動物實驗,蛋白組學實驗,芯片類實驗,并為廣大客戶朋友們提供課題設計指導、基金申請指導、SCI. 核心期刊等服務。

探針合成實驗服務



探針是- -小段單鏈DNA或者RNA--片段(大約是20到500 bp), 用于檢測與其互補的核酸序列。雙鏈DNA加熱變性成為單鏈,隨后用放射性同位素(通常用磷-32)、螢光染料或者酶 (如辣根過氧化物酶)標記成為探針。


實驗材料

基因


試劑、試

劑盒


轉錄緩沖液DTT RNA酶抑制劑CTP ATP S-UTP乙酸銨乙醇


儀器、耗


水溶鍋、離心機、培養箱、烘箱











實驗步驟

1.在一個含SP6. T3或T7啟動子的載體中,插入目的基因。在編碼序列下游酶切使質粒呈線

性。DNAL以酚/氨0仿抽提, 乙醇沉淀,70%乙醇洗后晾干。以無菌水重溶沉淀至1 ug/ul。

2.室溫配置如下反應混合液(總體積20μl) :

(1) 4.0 ul 5x轉錄緩)沖液

(2) 0.2 ul 1 mol/ DTT

(3) 60 U RNA酶抑制劑

(4) 1.0 ul三種10 mmol/l NTP中的每-種

(5) 1.0 ul 1 ug/ul酶切DNA

(6) 10.0μ ζ[35s] UTP

(7) 16 U SP6或T7 RNA聚合酶

(8) 37*C溫育30 min,再加16 U聚合酶并于37 °C溫育40 min。

3.在反應混合液中加入: 60 U RNA酶抑制劑,20 μl 10 mg/ml的載體RNA和1.0μl酶1,于37°C溫育10 min以除去摸板。

4.往反應混合液加入以下液體: 0.8 ul 1 mol/l DTT. 63 μul 無菌水和10 μI3 mol/l乙酸鈉,取出1 ul測定其cpm/ul值。

5.加36.4μ7.5 molM的乙酸銨于反應混合液(終濃度2 mol/)加50~100 ug tRNA載體和272ul冷無水乙醇,置干冰上沉淀10 min,以冷70%乙醇洗沉淀,晾干,需要的話可重復此步。以100μl 10 mmol/l DTT重溶DNA沉淀。


6.確定其cpm/μl值, 并計算摻入百分比,核糖核酸探針應于2~3天內使用。

(70%到90%的標記摻入,結果可得70~90 ng標記的RNA)





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