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了解相差顯微鏡

閱讀:3652      發(fā)布時間:2013-10-23
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相差顯微鏡對于觀察不染色的透明的細胞有著非常重要的意義,它能把透明細胞間細微的差別清晰的出現(xiàn)出來,達到觀察的目的。

相差顯微鏡(phasecontrast microscope)由P.Zernike于1932年發(fā)明,并因此獲1953年諾貝爾物理獎。這種顯微鏡zui大的特點是可以觀察未經(jīng)染色的標(biāo)本和活細胞。

相差顯微鏡的基本原理是,把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差,從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度,使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。光線透過標(biāo)本后發(fā)生折射,偏離了原來的光路,同時被延遲了1/4λ(波長),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變?yōu)?/2λ,兩束光合軸后干涉加強,振幅增大或減下,提高反差。在構(gòu)造上,相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個特殊之處:

1.環(huán)形光闌(annular diaphragm) 位于光源與聚光器之間,作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐,焦聚到標(biāo)本上。

2.相位板(annular phaseplate)在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種:

1.A+相板:將直射光推遲1/4λ,兩組光波合軸后光波相加,振幅加大,標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變亮,形成亮反差(或稱負反差)。

2.B+相板:將衍射光推遲1/4λ,兩組光線合軸后光波相減,振幅變小,形成暗反差(或稱正反差),結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變暗。

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