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人B細胞活化因子受體(BAFF-R)ELISA試劑盒

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產品型號48T/96T

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更新時間:2017-03-15 06:46:20瀏覽次數:734次

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產品名稱:人B細胞活化因子受體(BAFF-R)ELISA試劑盒

英文名稱:Human BAFF-R ELISAKit

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實驗原理:

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本B細胞活化因子受體(BAFF-R)水平。用純化的人B細胞活化因子受體(BAFF-R)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入B細胞活化因子受體(BAFF-R),再與HRP標記的B細胞活化因子受體(BAFF-R)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的B細胞活化因子受體(BAFF-R)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人B細胞活化因子受體(BAFF-R)濃度。

酶聯免疫吸附試驗

       ①直接法    該方法直接利用抗原 與酶聯抗體的結合,較簡單易行。A.假抗原。在聚苯乙烯酶標版的孔穴中加入待檢測的抗原(捕食者胃內含物抽提液)0.2mL,在4℃冰箱中過一夜,使抗原黏附于塑料孔壁上。B.洗滌兩次,倒置于干毛巾上,使孔穴中的液體盡量流出。c.加酶聯抗體。 各孔穴中加入酶聯抗體0.2mL,在mL37℃下孵育3h,使其充分結合。d. 加底物。 用PBS充分洗滌以除去未結合的酶聯抗體,然后加入底物(鄰苯二胺)0.2 mL,于37℃反應30min,用2mol/L硫酸0.05 mL終止反應。e. 用ELISA檢測儀測定其吸光度值,分別設陽性、陰性和空白對照,以確定陽性反應臨界值。

        ②雙抗體夾心法   該方法與直接法的不同在于吸附抗體。a. 包被抗體。酶標板的孔穴中加入0.2 mL抗體(用PH=9.6/0.05mol/L碳酸鹽緩沖液稀釋),置37℃水浴中孵育3h,移入4℃冰箱過一夜。將各孔中多余的抗體傾去,加入PBS洗滌,立即甩去,再將PBS加滿各板孔,置5min,甩去溶液,如此洗滌2次,倒置于干毛巾上,使孔穴中的液體盡量流出。b. 加待檢抗原。沒孔中加入待檢捕食者胃內含物抽提液0.2 mL.同時設陽性、陰性和空白(PBS)對照,37℃水溶中孵育3h,轉入冰箱中過一夜。如上法洗滌3次。C. 加入酶聯抗體。每孔加入酶聯抗體0.2 mL,37℃水浴孵育2h,如上法洗滌3次。d. 加底物。 每孔加入底物鄰苯二胺0.2 mL, 37℃水浴孵育1h,加入2mol/L硫酸0.05,以終止反應。e. 用 ELISA檢測儀測定其吸光度值。

       ③間接法  與前兩種方法不同點在于酶聯抗體與抗原的間接結合。a. 每孔加入待檢抗原0.2 mL ,4℃冰箱中過一夜,使抗原黏附于塑料孔壁上。并依上法洗滌3次。b. 每孔加0.2 mL,用PBS稀釋的抗體,37℃孵育2-3h。c.用PBS洗滌3次后,加入溶于PBS的酶聯抗體0.2mL,37℃孵育2-3h。d. 加底物,方法同上。e. 用ELISA檢測.

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