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上海寶葉生物科技有限公司
參考價(jià): | 面議 |
- 12209136001 產(chǎn)品型號(hào)
- Sigma-Aldrich 品牌
- 其他 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù):973更新時(shí)間:2024-03-29 16:31:58
- 聯(lián)系人:
- 蔣先生
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- 13391038817
- 地址:
- 上海市嘉定區(qū)新源路155弄
- 個(gè)性化:
- www.shjsbio.com
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- www.shjsbio.com
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供貨周期 | 一個(gè)月 | 貨號(hào) | 12209136001 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 |
TeloTAGGG™ 端粒長(zhǎng)度檢測(cè)試劑盒
別名:端粒
產(chǎn)品詳細(xì)資料如下:
由于DNA聚合酶不能復(fù)制線性DNA的末端,因此,有人認(rèn)為每個(gè)復(fù)制周期都會(huì)導(dǎo)致染色體末端逐漸縮短(稱(chēng)為“末端復(fù)制問(wèn)題")。已在體外和體內(nèi)經(jīng)過(guò)證實(shí)的這種現(xiàn)象,似乎與正常體細(xì)胞的有限增殖能力(“有絲分裂鐘")有關(guān)。由于生殖細(xì)胞、干細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞都表現(xiàn)出具有延長(zhǎng)甚至無(wú)限的壽命,因此有人提出這些細(xì)胞必須具有維持端粒長(zhǎng)度的特定機(jī)制。
保持穩(wěn)定的端粒長(zhǎng)度與端粒酶的激活有關(guān)。該酶是一種核糖核蛋白,利用其內(nèi)在RNA組分作為DNA合成的模板,通過(guò)在染色體末端添加重復(fù)序列來(lái)補(bǔ)償端粒DNA的丟失。
端粒通過(guò)與結(jié)構(gòu)蛋白發(fā)生特異性結(jié)合,對(duì)維持真核細(xì)胞內(nèi)染色體的穩(wěn)定性具有重要作用。這些蛋白質(zhì)可以封閉線性染色體的末端,防止核降解、染色體末端融合、不規(guī)則重組以及其他通常對(duì)細(xì)胞致命的事件。
對(duì)人類(lèi)外周血單核細(xì)胞研究樣本中端粒長(zhǎng)度的分析揭示了端粒長(zhǎng)度隨供體年齡的增加而降低,反映了這些細(xì)胞的復(fù)制史。已在多種疾病(如,唐氏綜合征、共濟(jì)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張和HIV感染)中發(fā)現(xiàn)存在端粒丟失加速的現(xiàn)象,表明端粒長(zhǎng)度縮短可能與這些疾病相關(guān)的免疫功能障礙有關(guān)。該試劑盒用于進(jìn)一步了解關(guān)于這些關(guān)系的科學(xué)知識(shí)。
分析時(shí)間:約18小時(shí)
樣品材料:細(xì)胞培養(yǎng)物和其他生物樣品
用于測(cè)定端粒長(zhǎng)度的非放射性化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法。
第1步:基因組DNA的消化
使用優(yōu)化的頻繁切割限制性?xún)?nèi)切酶混合物消化純化的基因組DNA。選擇的酶不會(huì)切割端粒DNA和亞端粒DNA。這是因?yàn)橹貜?fù)序列具有特殊序列特征。非端粒DNA被消化成低分子量片段。
第2步:凝膠電泳和Southern印跡
在DNA消化后,通過(guò)凝膠電泳分離DNA片段,然后通過(guò)Southern印跡將其轉(zhuǎn)印至尼龍膜上。
第3步:雜交和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)
轉(zhuǎn)印的DNA片段與端粒重復(fù)序列的特異性DIG標(biāo)記探針雜交,然后使用與堿性磷酸酶共價(jià)連接的DIG特異性抗體孵育。最后,使用堿性磷酸酶的高靈敏度化學(xué)發(fā)光底物CDP-Star,使固定的端粒探針顯色。通過(guò)對(duì)比信號(hào)與分子量標(biāo)準(zhǔn)品,可確定平均TRF長(zhǎng)度。
應(yīng)用
特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)
安全:非放射性
靈活:檢測(cè)來(lái)自各種生物體(包括人類(lèi)和小鼠)的端粒
包裝
序列
制備說(shuō)明
以下濃度應(yīng)作為使用指南:
斑點(diǎn)雜交印跡:100 ng/ml
ELISA:100 ng/ml
蛋白質(zhì)免疫印跡:100 ng/ml
工作濃度:TAE緩沖液
0.04 M Tris-乙酸,0.001 M EDTA,pH 8.0
HCl溶液
0.25 M HCl
一個(gè)200 cm2 的印跡需要約250 ml溶液。
變性 溶液
0.5 M NaOH,1.5 M NaCl
一個(gè)200 cm2 印跡需要約500 ml溶液。
中和液
0.5 M Tris-HCl,3 M NaCl,pH 7.5
一個(gè)200 cm2 印跡需要約500 ml溶液。
20x SSC
3 M NaCl,0.3 M檸檬酸鈉,pH 7.0
2x SSC
使用經(jīng)高壓滅菌的重蒸水稀釋20x SSC(溶液5),稀釋比例為1:10。
DIG Easy Hyb雜交顆粒
使用64 ml經(jīng)高壓滅菌的重蒸水重懸顆粒(瓶8),并在37 °C孵育至全重懸。臨用前幾小時(shí)制備溶液。
嚴(yán)格洗滌緩沖液I
2x SSC,0.1% SDS
嚴(yán)格洗滌緩沖液II
0.2x SSC,0.1% SDS
洗滌緩沖液,1x
使用經(jīng)高壓滅菌的重蒸水稀釋適量的洗滌緩沖液10倍濃縮液(瓶10),稀釋比例為1:10。
封閉液,1x
使用1x馬來(lái)酸緩沖液(溶液12)稀釋適量的封閉液10倍濃縮液(瓶12),稀釋比例為1:10。
馬來(lái)酸緩沖液,1×
使用經(jīng)高壓滅菌的重蒸水稀釋適量的馬來(lái)酸緩沖液10倍濃縮液(瓶11),稀釋比例為1:10。
DIG-AP抗體,工作溶液
為減少聚集抗體產(chǎn)生的背景,請(qǐng)?jiān)谑褂们皩⒃噭┢恳?3,000 rpm離心5分鐘。
使用1x封閉液(溶液11)將適量DIG-AP抗體(瓶13)溶液稀釋至終濃度為75 mU/ml (1:10,000)。
檢測(cè)液,1x
使用經(jīng)高壓滅菌的重蒸水稀釋適量的檢測(cè)液10倍濃縮液(瓶14),稀釋比例為1:10。
儲(chǔ)存條件(工作溶液):TAE緩沖液:
在15至25 °C下穩(wěn)定保存
HCl溶液
在15至25 °C下穩(wěn)定保存
變性 溶液
在15至25 °C下穩(wěn)定保存
中和液
在15至25 °C下穩(wěn)定保存
20x SSC
在15至25 °C下穩(wěn)定保存
2x SSC
在15至25 °C下穩(wěn)定保存
DIG Easy Hyb雜交顆粒
在15至25 °C下穩(wěn)定保存3個(gè)月
嚴(yán)格洗滌緩沖液I
在15至25 °C下穩(wěn)定保存
嚴(yán)格洗滌緩沖液II
在15至25 °C下穩(wěn)定保存
洗滌緩沖液,1x
在15至25 °C下穩(wěn)定保存
封閉液,1x
臨用前配制。請(qǐng)勿儲(chǔ)存
馬來(lái)酸緩沖液,1×
在15至25°C下穩(wěn)定保存。
DIG-AP抗體,工作溶液
臨用前配制。請(qǐng)勿儲(chǔ)存
檢測(cè)液,1x
在15至25°C下穩(wěn)定保存
其他說(shuō)明
僅用于生命科學(xué)研究。不可用于診斷。
上海寶葉生物科技有限公司專(zhuān)業(yè)供應(yīng)TeloTAGGG™ 端粒長(zhǎng)度檢測(cè)試劑盒