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線粒體探針應(yīng)用 - 羅丹明123(Rh 123)

2024-11-26  閱讀(81)

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產(chǎn)品概述

Rhodamine 123(Rh123)作為一種在細胞生物學(xué)研究中被廣泛運用的熒光染料,具有的性質(zhì)和重要的應(yīng)用價值。它能夠選擇性地在活細胞的線粒體內(nèi)積聚,因此常被用于對線粒體功能及細胞活力的研究。Rh123在化學(xué)性質(zhì)方面表現(xiàn)得極,屬于親脂性陽離子染料,憑借其脂溶性可輕松透過細胞膜,并借助線粒體膜電位在線粒體內(nèi)積累。從光學(xué)角度來看,當(dāng)激發(fā)波長為488 nm時,Rh123被激活,在530 nm處會發(fā)出強烈的綠色熒光。由于具有高量子的熒光發(fā)射效率,Rh123能夠產(chǎn)生高對比度的熒光信號,從而成為細胞生物學(xué)實驗中極為有用的工具。


產(chǎn)品應(yīng)用

細胞活力測定:通過檢測細胞內(nèi)的Rh123熒光強度,可以評估細胞的活力狀態(tài)。

線粒體功能檢測:Rh123的熒光強度與線粒體膜電位成正比,可用于評估線粒體是否處于健康狀態(tài)。

藥物篩選:可用于篩選影響線粒體功能的藥物,評估藥物對細胞生理功能的影響。


溶液的配制

DMSO 溶解,終濃度為1 - 5 mM。溶液分裝,避光保存于-20oC。


使用方法

1、用載玻片準備細胞。細胞數(shù)目應(yīng)為5×1045×105/mL。

2、孵育該載玻片,用PBS或Hanks液洗滌細胞。

3、用培養(yǎng)基稀釋Rh123母液以制備1~20 µM Rh123緩沖液。具體工作濃度取決于細胞類型和細胞濃度。

4、Rh123緩沖液加入載玻片并在37℃下孵育30 min至1小時。

5、去除Rh123緩沖液并用培養(yǎng)基洗滌細胞(洗滌細胞后為了固定,加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15~20 min,接著PBS洗滌)。

6、用帶有熒光素濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞


常見問題

1. 染色不足的原因

可能是染料濃度過低或孵育時間不足。可以適當(dāng)增加Rh123濃度或延長孵育時間。

  1. 過度染色的原因

染料濃度過高或孵育時間過長,會引起非特異性染色。可嘗試降低 Rh123濃度或縮短孵育時間。

  1. 線粒體熒光信號弱的處理方式

①可能是細胞狀態(tài)不佳或線粒體功能受損。

②對于線粒體含量較少的細胞,可以使用較高的染料濃度和較長的孵育時間


相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

Rhodamine 123 羅丹明123

40712ES08

5mg

MitoTracker® Red CM-H2XRos
線粒體紅色熒光探針

40740ES50

50µg

MitoTracker® Red CMXRos
線粒體紅色熒光探針

40741ES50

50µg

MitoTracker® Green FM
線粒體綠色熒光探針

40742ES50

50µg

MitoTracker® Deep Red FM
線粒體深紅色熒光探針

40743ES50

50µg



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