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產品簡介
| 供貨周期 | 一周 | 貨號 | 20202ES76 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
Bradford Protein Quantification Kit
Bradford蛋白濃度測定試劑盒
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
Bradford Protein Quantification Kit | 20202ES76 | 500T | 4℃ | 98.00 |
Bradford蛋白濃度測定試劑盒 | 20202ES86 | 2500T | 4℃ | 398.00 |
產品描述
Bradford蛋白濃度測定法是目前常用的靈敏度較高的蛋白濃度測定方法之一。它是根據Bradford染液（考馬斯亮藍G-250染料）與蛋白結合，使染料的zui大吸收峰從A456變為A595，且測定的吸光值與蛋白濃度成正比關系的原理設計的。本法通過吸光值，推算蛋白濃度，實現了蛋白濃度測定的快速性和簡便性。靈敏度高，比Lowry法大約高四倍，zui低蛋白檢測量可達1μg。測定速度快、簡單，僅需一種試劑即可，且不受大多數樣品中化學試劑的影響。
我司提供二種規格的Bradford蛋白濃度檢測試劑盒，比色皿法分別可做125次和625次。酶標法分別可做500次和2500次。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | |
20202ES76 (500T) | 20202ES86 (2500T) | ||
20202-A | Bradford蛋白染色液 | 125ml | 5×125 ml |
20202-B | 蛋白標準品（BSA） | 5×1ml（2mg/ml） | 5×2ml（2mg/ml） |
運輸與保存方法
冰袋運輸。
染色液4℃保存，蛋白標準品常溫或4℃保存，有效期一年。
注意事項
1）Bradford染色液使用前，應充分混勻。同時，酶標儀需預熱20min。
2）Bradford染色液需恢復到室溫再使用，有利于提高檢測的靈敏度。另，使用前需顛倒幾次以充分混勻。
3）由于Bradford染液的顏色反應并不是同遞增的蛋白濃度呈線性關系，因此每次試驗都必須建立標準曲線。另外，為了得到更精確的結果，每個蛋白梯度和樣品均需做復孔。
4）Bradford法測定蛋白濃度對大多數化學物質的兼容性比較好，比如對還原劑DTT的兼容性高達5mM。但會受到略高濃度的去垢劑影響，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。對于含去垢劑的樣品，建議使用BCA增強型蛋白定量檢測試劑盒【貨號：20201ES76】。
5）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
操作方法
一、配制標準品
1. 配制BSA標準品體系
【注】：標準品稀釋液為蛋白樣品的溶解液，原則上蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS進行稀釋。
BSA標準品體系配制可參考表一。
表一BSA標準品體系配制（微孔板檢測，線性范圍100-1500μg/ml）
Vial | 稀釋液體積(μl) | 2mg/ml BSA體積(μl) | BSA終濃度(μg/ml) |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 125 | 75 | 750 |
E | 150 | 50 | 500 |
F | 350 | 50 | 250 |
G | 375 | 25 | 125 |
H | 395 | 5 | 25 |
I | 400 | 0 | 0=Blank |
二、檢測方法
A. 標準比色皿檢測（線性范圍：100-1500μg/ml）
1）各取20μl不同濃度標準品和待測樣品加入到反應管中；
2）加入1ml Bradford染色液，混勻。室溫孵育10min。【注】：樣本室溫孵育時間不可超過1h；
3）分光光度計上測定595nm處的吸光度，用裝滿水的比色皿對儀器校零。之后測定所有樣本濃度。
4）根據BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即zui終的讀數），繪制標準曲線（X-蛋白濃度μg/ml；Y-zui終的OD595nm）。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
B. 標準微孔板檢測（線性范圍：100-1500μg/ml）
1）各取5μl各濃度標準品和待測樣品加入到微孔板中；
2）每孔加入250μl Bradford染色液，振蕩30s充分混勻。蓋上微孔板，室溫孵育10min。【注】：樣本室溫孵育時間不可超過1h；
3）酶標儀上測定595nm處的吸光度。或者其他575~615nm波長范圍內的吸光度，但是相對于595nm，吸光度會存在~10%的損失。
4）根據BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即zui終的讀數），繪制標準曲線（X-蛋白濃度μg/ml；Y-zui終的OD595nm）。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。
【注】：a）由于酶標板的光徑比比色皿短，經酶標板檢測得到的OD595nm會低于比色皿檢測所得，因此可能降低本法的檢測下限。要得到更高的OD595nm，可使用7-10μl標準品/待檢樣本，和250μl Bradford染色液來進行檢測。b）如果使用與酶標儀相關的曲線擬合算法（curve fitting algorithm），那么四參數或者*擬合曲線可能得到更為精確的結果，并不是單純的線性擬合。若是手動標記各點濃度，點-點曲線出來的結果精確于線性擬合。若對結果準確性的要求不是非常嚴格，可使用線性擬合分析數據。
附錄
表：Brandford蛋白濃度測定的兼容性
名稱（鹽/緩沖液） | 耐受濃度 |
ACES, pH 7.8 | 100mM |
Ammonium sulfate | 1M |
Asparagine | 10mM |
Bicine, pH 8.4 | 100mM |
Bis-Tris, pH 6.5 | 100mM |
Borate (50mM), pH 8.5 | undiluted |
Calcium chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
Na-Carbonate/Na-Bicarbonate (0.2M), pH 9.4 | undiluted |
Cesium bicarbonate | 100mM |
CHES, pH 9.0 | 100mM |
Na-Citrate (0.6M), Na-Carbonate (0.1M), pH 9.0 | undiluted |
Na-Citrate (0.6M), MOPS (0.1M), pH 7.5 | undiluted |
Cobalt chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
EPPS, pH 8.0 | 100mM |
Ferric chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
Glycine | 100mM |
Guanidine?HCl | 3.5M |
HEPES, pH 7.5 | 100mM |
Imidazole, pH 7.0 | 200mM |
MES, pH 6.1 | 100mM |
MES (0.1M), NaCl (0.9%), pH 4.7 | undiluted |
MOPS, pH 7.2 | 100mM |
Nickel chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
PBS; Phosphate (0.1M), NaCl (0.15M), pH 7.2 | undiluted |
PIPES, pH 6.8 | 100mM |
RIPA lysis buffer; 50mM Tris, 150mM NaCl,0.5% DOC, 1% NP-40, 0.1% SDS, pH 8.0 | 1/10 dilution* |
Sodium acetate, pH 4.8 | 180mM |
Sodium azide | 0.5% |
Sodium bicarbonate | 100mM |
Sodium chloride | 5.0M |
Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4 | 200mM |
Sodium phosphate | 100mM |
Tricine, pH 8.0 | 100mM |
Triethanolamine, pH 7.8 | 100mM |
Tris | 2M |
TBS; Tris (25mM), NaCl (0.15M), pH 7.6 | undiluted |
Tris (25mM), Glycine (192mM), pH 8.0 | undiluted |
Tris (25mM), Glycine (192mM), SDS (0.1%), pH 8.3 | 1/2 dilution* |
Zinc chloride in TBS, pH 7.2 | 10mM |
名稱（變性劑） | 耐受濃度 | 還原劑以及巰基試劑 | 耐受濃度 |
Brij?-35 | 0.125% | Dithiothreitol (DTT) | 5mM |
Brij-56, Brij-58 | 0.031% | Glucose | 1M |
CHAPS, CHAPSO | 5.0% | Melibiose | 100mM |
Deoxycholic acid | 0.05% | 2-Mercaptoethanol | 1M |
Lubrol? PX | 0.125% | Potassium thiocyanate | 3M |
Octyl β-glucoside | 0.5% | Thimerosal | 0.01% |
Nonidet P-40 (NP-40) | 0.5% | Misc. Reagents & Solvents | 耐受濃度 |
Octyl β-thioglucopyranoside | 3.0% | Acetone | 10% |
SDS | 0.125% | Acetonitrile | 10% |
Span? 20 | 0.5% | Aprotinin | 10mg/L |
Triton? X-100, X-114 | 0.125% | DMF, DMSO | 10% |
Triton X-305, X-405 | 0.5% | Ethanol | 10% |
Tween?-20 | 0.062% | Glycerol (Fresh) | 10% |
Tween-60 | 0.1% | Hydrochloric Acid | 100mM |
Tween-80 | 0.062% | Leupeptin | 10mg/L |
Zwittergent? 3-14 | 0.025% | Methanol | 10% |
螯合劑 | 耐受濃度 | Phenol Red | 0.5mg/mL |
EDTA | 100mM | PMSF | 1mM |
EGTA | 2mM | Sodium Hydroxide | 100mM |
Sodium citrate | 200mM | Sucrose | 10% |
還原劑以及巰基試劑 | 耐受濃度 | TLCK | 0.1mg/L |
N-acetylglucosamine in PBS, pH 7.2 | 100mM | TPCK | 0.1mg/L |
Ascorbic acid | 50mM | Urea | 3M |
Cysteine | 10mM | o-Vanadate (sodium salt), in PBS, pH 7.2 | 1mM |
Dithioerythritol (DTE) | 1mM |
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