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您現在的位置: 翌圣生物科技(上海)股份有限公司>>蛋白與免疫>>蛋白純化>> 20509ES03GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML
20509ES03GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML
參考價: 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 20509ES03 產品型號
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產商 廠商性質
  • 上海市 所在地

訪問次數:752更新時間:2022-02-10 11:55:59

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產品簡介
GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF是一種GST標簽蛋白純化樹脂,可以一步純化各種表達系統中谷胱甘肽-S-轉移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽重組衍生物。在結構上,該樹脂是以高度交聯的4%瓊脂糖凝膠為基質,通過12個原子的間隔臂,用化學方法共價結合還原型谷胱甘肽制作而成,具有更高的物理化學特性,可以耐受更高的壓力,在相對較高的流速下,實現對目的蛋白的純化
產品介紹

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML

GST標簽蛋白純化預裝柱,1ML

產品信息

產品名稱          

產品編號

規格

儲存

價格(元)

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML

GST標簽蛋白純化預裝柱,1ML

20509ES03

1ml

4

328.00

20509ES08

5×1ml

4

1348.00

產品描述

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF是一種GST標簽蛋白純化樹脂,可以一步純化各種表達系統中谷胱甘肽-S-轉移酶、谷胱甘肽依賴性蛋白和谷胱甘肽重組衍生物。在結構上,該樹脂是以高度交聯的4%瓊脂糖凝膠為基質,通過12個原子的間隔臂,用化學方法共價結合還原型谷胱甘肽制作而成,具有更高的物理化學特性,可以耐受更高的壓力,在相對較高的流速下,實現對目的蛋白的純化,更適于工業大規模蛋白的純化。

是裝填了GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF的一種中壓預裝柱,規格1ml,預裝柱具有標準接口,可以適配商品化的各類中壓色譜系統,如?KTA 等,方便客戶操作。

產品性質

基質(Matrix

高度交聯的4%瓊脂糖微球

配體(Ligand

通過12原子間隔臂偶聯的谷胱甘肽

孔徑(Bead size

45-165μm

載量(Capacity

10mg GST protein/ml 基質(40kDa

zui大壓力(PressureMax

0.3 MPa, 3bar

pH穩定范圍(pH range

3-12

儲存緩沖液(Buffer

20%乙醇

運輸和保存方法

冰袋運輸。4保存,有效期2年。

需準備試劑

所用水和Buffer在使用前用0.22μm0.45μm濾膜過濾除菌。

結合/洗雜緩沖液PBSpH7.4(140mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH7.4)

洗脫緩沖液50mM Tris-HCl, 10mM 還原型谷胱甘肽,pH 8.0

【注】:結合/洗雜緩沖液或者洗脫緩沖液中可加入1-10mM DTT









使用方法

【注】樣品在上樣前用0.22μm0.45μm濾膜過濾,減少雜質以防阻塞柱子。

1樣品純化(以Akta為例)

1準備:將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子,將層析柱連接至色譜系統中。再折斷下口,將預裝柱接到色譜系統中,并旋緊。

2清洗3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲存液。

3平衡:5倍柱體積的結合Buffer平衡層析柱,使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,起到保護蛋白的作用。

4上樣:將樣品加到平衡好的層析柱中,推薦流速1ml/min,保證目的蛋白與樹脂充分接觸,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待檢測。

【注】:樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少,也會導致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓,使得進樣器更難使用。

5洗雜:10-15倍柱體積的洗雜Buffer進行清洗,直到紫外吸收達到一個穩定的基線,去除非特異性吸附的雜蛋白,收集洗雜液,待檢測。

6洗脫:用洗脫Buffer 采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中,通常5倍柱體積洗脫液足夠將目的蛋白洗脫下來。也可以用一個小的梯度,例如20倍柱體積或更多,來分離不同結合強度的蛋白質。

7清洗及保存:依次使用3倍柱體積的結合Buffer5倍柱體積的去離子水平衡填料,zui后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡,然后保存在等體積的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被細菌污染。

2 SDS-PAGE檢測

將純化過程中得到的樣品(包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等)利用SDS-PAGE進行檢測,判定其純化效果。

3 填料清洗

GST標簽蛋白純化產品可以重復使用而無需再生,但隨著非特異結合蛋白的增多和蛋白的聚集,會造成流速和結合載量性能下降,此時需對填料進行清洗。

1)去除一些沉淀或變形物質

2倍柱體積的6M 鹽酸胍溶液進行清洗,然后立即用5倍柱體積的PBSpH7.4清洗。

2)去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質

3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積1% Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱體積的PBSpH7.4清洗。

注意事項

1)請勿冷凍保存本產品。

2)所有操作過程中,樣本需要在4或冰上操作。

3)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


附表 問題及解決方案

問題

可能原因

推薦解決方案

柱子反壓過高

填料被堵塞

清洗樹脂。

裂解液中含有微小的固體顆粒,建議上樣前用0.22μm0.45μm濾膜過濾,或離心去除。

樣品太黏稠

樣品中含高濃度的核酸,延長破碎時間直至粘度降低,或添加DNaseI (終濃度為5μg/ml),Mg2+(終濃度1mM),冰上孵育10-15min

緩沖液太黏稠

有機試劑或蛋白穩定試劑(如甘油等)可能會引起反壓增高,降低操作流速。

洗脫組分中無目的蛋白

GST標簽蛋白變性了

使用溫和的裂解條件,實驗條件以經驗為準。

過度的裂解使目的蛋白變性

目的蛋白聚集產生沉淀

在細胞裂解前溶液中加入DTT,終濃度為1-10mM

融合蛋白改變了GST的構象,影響了目的蛋白的結合力

測定pGEXGST的結合力,對載體進行超聲處理,檢測其結合力。如果載體中GST有很高的親和力,有可能是改變融合蛋白的構象從而降低了GST標簽蛋白的親和力。

降低結合溫度至4,充分清洗。

柱子平衡時間太短,目的蛋白不是在pH6.5-pH8.0范圍內結合

pH6.5-pH8.0buffer進行充分的平衡,如PBS.

目的蛋白沒有*洗脫下來

洗脫體積太少

增加洗脫液體積,減小洗脫流速。

洗脫液中谷胱甘肽濃度太低

增加洗脫液中谷胱甘肽濃度,可嘗試用50mM Tris-HCl, 20-40mM還原型谷胱甘肽pH8.0洗脫

pH影響洗脫

在不增加洗脫液中谷胱甘肽量時,提高洗脫液中pHpH8-9會有改善

增加洗脫液中離子強度,如0.1-0.2M NaCl

洗脫液中谷胱甘肽被氧化

使用新鮮配制的洗脫液

加入DTT

非特異性疏水作用影響目的蛋白的溶解和洗脫

洗脫液中加入非離子型洗滌劑,如0.1%Triton X-100或者2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷Tween-20

電泳或western blot檢測中發現多條帶

Mr 70000蛋白與目的蛋白一起純化下來

Mr 70000蛋白可能是大腸桿菌基因DnaK的產物,可以在目的蛋白中加入50mM Tris-HCl, 2mM ATP, 10mM MgSO4, pH 7.437加熱10min去除。

可通過ATP-瓊脂糖膠或離子交換來去除目的蛋白溶液中的dnaK蛋白

GST融合蛋白已經發生降解

在裂解液中加入蛋白酶抑制劑,如加入1 mM PMSF

可能是蛋白酶對目的蛋白部分降解造成的,可使用蛋白酶缺陷型宿主菌(如lon-ompT

細胞破碎過度

減少細胞破碎時間,超聲前加入溶菌酶(菌液體積的0.110mg/ml溶菌酶,25mM Tris-HClpH8.0),避免發泡導致蛋白酶變性,過度超聲破碎增加宿主內源蛋白與GST融合目的蛋白的共純化。

共價共純化

包括促進蛋白正確折疊的分子伴侶的共純化,如:DnaK(Mr70000), DnaJ(Mr37000), GrpE(Mr 40000), GroEL(Mr57000), GroES(Mr 10000)

抗體與E. coli的各種蛋

白反應

抗體吸附E. coli蛋白:GST-抗體;超聲處理去除GST抗體,可以用Western Blot檢測

相關產品

產品編號

產品名稱

規格

價格

20507ES10

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽瓊脂糖樹脂(用于GST標簽蛋白純化)

10ml

928.00

20507ES50

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽瓊脂糖樹脂(用于GST標簽蛋白純化)

50ml

3848.00

20507ES60

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽瓊脂糖樹脂(用于GST標簽蛋白純化)

100ml

6898.00

20508ES10

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速純化樹脂(用于GST標簽蛋白純化)

10ml

1238.00

20508ES50

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速純化樹脂(用于GST標簽蛋白純化)

50ml

4568.00

20508ES60

GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速純化樹脂(用于GST標簽蛋白純化)

100ml

7928.00

20510ES08

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5MLGST標簽蛋白純化預裝柱,5ML

5ml

938.00

20510ES25

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 5MLGST標簽蛋白純化預裝柱,5ML

5×5ml

3928.00




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