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參考價(jià): | 面議 |
- 36414ES08 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
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Protein G 4FF Chromatography Column, 5ML
蛋白G純化預(yù)裝柱,5ML
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價(jià)格(元) |
Protein G 4FF Chromatography Column, 5ML 蛋白G純化預(yù)裝柱,5ML | 36414ES08 | 5ml | 4℃ | 1848.00 |
Protein G 4FF Chromatography Column, 5ML 蛋白G純化預(yù)裝柱,5ML | 36414ES25 | 5×5ml | 4℃ | 6838.00 |
產(chǎn)品描述
天然蛋白G(Protein G)是一種分離自G型或C型鏈球菌屬的細(xì)胞表面蛋白,與發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁表面的蛋白A類似,主要通過與免疫球蛋白(Ig)的Fc區(qū)相互作用,結(jié)合大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG,可用于多種抗體(單抗和多抗)的分離純化。在與不用的免疫球蛋白亞類的結(jié)合特性上,ProteinA 和Protein G結(jié)合性能不太一樣,相比ProteinA, ProteinG 對牛、羊、馬等多克隆抗體有更強(qiáng)的結(jié)合力,它還可以結(jié)合不能與ProteinA很好結(jié)合的大鼠lgG、人lgG3和小鼠lgG1(詳見附錄1)。
本品使用的是基因改造后的蛋白G,不僅維持其本身的Ig親和特性,同時(shí)也去除了天然蛋白本身的非主要結(jié)合域以降低非特異性結(jié)合,Protein G Agarose Resin 4FF以高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠為基質(zhì),重組Protein G為配基,具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性,可以在相對較高的流速下進(jìn)行抗體的純化,適用于工業(yè)客戶。利用本品經(jīng)過一步親和層析,即可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體,使用方便,應(yīng)用廣泛。
本品Protein G 4FF Chromatography Column,5ml是一種裝填了Protein G Agarose Resin 4FF的中壓預(yù)裝柱,規(guī)格5ml,預(yù)裝柱具有標(biāo)準(zhǔn)接口,可以適配商品化的各類中壓色譜系統(tǒng),如?KTA 等,方便客戶操作。
產(chǎn)品性質(zhì)
基質(zhì)(Matrix) | 高度交聯(lián)的4%瓊脂糖微球 |
配體(Ligand) | 重組蛋白G |
孔徑(Bead size) | 45-165μm |
zui大流速(Flowmax) | 0.3MPa,3bar |
儲存緩沖液(Buffer) | 含20%乙醇的1×PBS |
載量(Capacity) | >30mg human IgG/ml 基質(zhì) |
pH范圍(pH range) | 3-10 |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。4℃保存,2年有效。
需準(zhǔn)備試劑
【注】:建議以下緩沖液在使用前用0.22μm或0.45μm濾膜過濾。
結(jié)合/洗雜緩沖液:0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0
洗脫緩沖液:0.1M甘氨酸,pH 3.0
中和液:1M Tris-HCl,pH 8.5
使用方法
【注】:上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強(qiáng)度和pH值,可以用結(jié)合/洗雜緩沖液對血清樣品、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋,或者樣品用結(jié)合/洗雜緩沖液透析。
1樣品純化(以Akta系統(tǒng)為例)
1)準(zhǔn)備:將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子,將層析柱連接至色譜系統(tǒng)中。再折斷下口,將預(yù)裝柱接到色譜系統(tǒng)中,并旋緊。
2)清洗:3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲存液。
3)平衡:用5倍柱體積的結(jié)合Buffer平衡層析柱,使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下,起到保護(hù)蛋白的作用。
4)上樣:將樣品加到平衡好的層析柱中,推薦流速1-5ml/min,保證目的蛋白與樹脂充分接觸,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待檢測。
【注】:樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少,也會導(dǎo)致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結(jié)合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓,使得進(jìn)樣器更難使用。
5)洗雜:用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗,直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線,去除非特異性吸附的雜蛋白,收集洗雜液,待檢測。
6)洗脫:用洗脫Buffer 采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中,通常5倍柱體積洗脫液足夠?qū)⒛康牡鞍紫疵撓聛?。也可以用一個(gè)小的梯度,例如20倍柱體積或更多,來分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì)。
7)清洗及保存:依次使用3倍柱體積的結(jié)合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料,zui后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡,然后保存在等體積的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被細(xì)菌污染。
2 SDS-PAGE檢測
將純化過程中得到的樣品(包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等)利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測,判定其純化效果。
3 樹脂清洗
隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和結(jié)合載量下降,影響柱子的性能,這時(shí)需對柱子進(jìn)行清洗:
1)去除沉淀或變性物質(zhì)
① 用2倍柱體積的6M 鹽酸胍溶液進(jìn)行清洗;
② 用5倍柱體積的PBS,pH 7.4 清洗。
2)去除由于疏水性吸附造成的非特異吸附物質(zhì)
① 用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton? X-100清洗;
② 用5倍柱體積的PBS, pH 7.4 清洗。
注意事項(xiàng)
1)請勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2)所有操作過程中,樣本需要在4℃或冰上操作。
3)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
附錄1. 蛋白A,G對不同物種Ig的結(jié)合能力總表
免疫球蛋白亞型 | Protein A | Protein G | 免疫球蛋白亞型 | Protein A | Protein G |
Human IgG | ++++ | ++++ | Mouse IgG | ++++ | ++++ |
Human IgG1 | ++++ | ++++ | Mouse IgG1 | + | ++++ |
Human IgG2 | ++++ | ++++ | Mouse IgG2a | ++++ | ++++ |
Human IgG3 | + | ++++ | Mouse IgG2b | +++ | +++ |
Human IgG4 | ++++ | ++++ | Mouse IgG3 | ++ | +++ |
Human IgM | Use anti-Human IgM | Mouse IgM | Use anti-Mouse IgM | ||
Human IgE | NR | NR | Chicken IgG (IgY) | NR | NR |
Human IgA | + | NR | Cow IgG | ++ | ++++ |
Human IgA1 | + | NR | Goat IgG | + | ++++ |
Human IgA2 | + | NR | Goat IgG1 | + | ++++ |
Human IgD | Use anti-Human IgD | Goat IgG2 | ++++ | ++++ | |
Rat IgG | + | ++ | Goat IgM | NR | NR |
Rat IgG1 | NR | + | Guinea Pig IgG | ++++ | ++ |
Rat IgG2a | NR | ++++ | Guinea Pig IgG1 | ++++ | ++ |
Rat IgG2b | NR | + | Guinea Pig IgG2 | ++++ | ++ |
Rat IgG3 | + | ++ | Hamster IgG | + | ++ |
Sheep IgG | + | ++ | Horse IgG | + | ++++ |
Sheep IgG1 | + | ++ | Rabbit IgG | ++++ | +++ |
Sheep IgG2 | + | ++ | Rabbit IgM | NR | NR |
Sheep IgM | NR | NR | Rabbit All isotypes | +++ | ++ |
Pig IgG | +++ | +++ | Monkey IgG | ++++ | ++++ |
Cat IgG | ++++ | + | Donkey IgG | ++ | ++++ |
Dog IgG | ++++ | + | |||
(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested; |
附錄2 常見問題與解答
問題 | 可能原因 | 推薦解決方法 |
柱子反壓過高 | 填料被堵塞 | 清洗填料 |
裂解液中含有微笑的固體顆粒,建議上柱前使用0.22μm/0.45μm濾膜過濾。 | ||
樣品純化過程中曲線不穩(wěn) | 樣品或 buffer 中有氣泡 | 趕出氣泡 |
樣品和buffer進(jìn)行脫氣 | ||
洗脫組分中沒有目的蛋白 | 樣品中抗體濃度太低 | 使用其抗原做配體的介質(zhì) |
抗體被降解 | 適當(dāng)?shù)奶岣呦疵?/span>pH | |
樣品與Protein G結(jié)合力低 | 換用Protein A或Protein A/G樹脂純化 | |
回收率逐漸減低 | 上樣量太多 | 減少上樣量 |
柱子太臟,載量降低 | 清洗樹脂 |
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