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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 10000 U |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 11111ES92 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐熱逆轉錄酶 | 11111ES92 | 10000 U | 1426.00 |
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐熱逆轉錄酶 | 11111ES93 | 50000 U | 4626.00 |
產品描述
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase是在Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase基礎上通過基因工程技術得到的新一代逆轉錄酶，與Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比，其cDNA合成速度快，且熱穩定性大幅度提高，可耐受高達60℃的反應溫度，適合具有復雜二級結構的RNA模板的逆轉錄。同時，該酶增強了與模板的親和力，非常適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉錄。Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase合成全長cDNA的能力也有了提升，可擴增長達19.8 kb的cDNA。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | |
11111ES92 (10000 U) | 11111ES93 (50000 U) | ||
11111-A | 5×Hifair® Ⅲ Buffer | 250 μL | 1250 μL |
11111-B | Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
產品應用
全長cDNA文庫構建；終點法PCR；實時定量PCR等。
活性定義
以Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物，在37℃，10 min內，將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質所需要的酶量定義為1個活性單位（U）。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期1年。
注意事項
1）請保持實驗區域潔凈；操作時需穿戴干凈的手套、口罩；實驗所用耗材均需保證RNase free，以防止RNase污染；
2）所有操作均應在冰上進行，防止RNA降解；
3）為保證高效率逆轉錄，建議使用高質量的RNA樣本；
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
5）本產品僅作科研用途。
第一鏈cDNA合成操作步驟
1. RNA變性（此步為可選步驟，RNA變性有助于打開二級結構，可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產量。）
組分 | 使用量 |
RNase free H2O | to 13 μL |
Oligo (dT)18 (50 μM) | 1 μL |
or Random Primers (50 μM) | or 1 μL |
or Gene Specific Primers (2 μM) | or 1 μL |
模板RNA | Total RNA: 10 pg -5 μg或mRNA:10 pg-500 ng |
65℃加熱5 min，迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應液后加入下表中的逆轉錄反應液，并用移液器輕輕吹打混勻。
2. 逆轉錄反應體系配制（20 μL體系）
組分 | 使用量 |
上一步的反應液 | 13 μL |
5×Hifair® Ⅲ Buffer | 4 μL |
dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 1 μL |
RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
3. 逆轉錄程序設置
溫度 | 時間 |
25℃ | 5 min |
55℃ | 15-30 min |
85℃ | 5 min |
【注】：1）當使用Random Primers時，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略；
2）逆轉錄溫度：推薦使用55℃；對于高GC含量模板或者復雜模板，可將逆轉錄溫度提高到60℃；
3) 可將逆轉錄時間延長到45-60min，有助于提高產量；
4）85℃加熱5 min，目的是使逆轉錄酶失活。
※ 逆轉錄產物可立即用于后續PCR或qPCR反應，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復凍融。
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