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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1 mL |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10137ES03 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
| 主要用途 | 高通量測序領域中多重PCR文庫構建 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
5× Hieff Canace® PCR Master Mix高保真pcr預混液（for Multiplex PCR) | 10137ES03 | 1 mL | 1215.00 |
10137ES08 | 5×1 mL | 3065.00 | |
10137ES25 | 25×1 mL | 11165.00 | |
10137ES76 | 500 mL | 178655.00 |
產品描述
5× Hieff Canace® PCR Master Mix高保真pcr預混液 (for Multiplex PCR)是基于新一代高保真DNA聚合酶Canace開發的，針對于高通量測序領域中多重PCR文庫構建應用專門優化的。Canace酶基于Pyrococcus furiosis DNA Polymerase，經基因工程改造而成。其蛋白結構包含5’→3’聚合酶結構域和經過改造的3’→5’外切酶結構域。這種組合大幅度提升了酶的耐熱性，保真性。耐熱溫度達到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了*的延伸因子，擴增速度達到15 sec/kb。本產品為5×mix PCR混合液，可添加的模板、引物體積范圍大，使您的實驗更加靈活（本公司另有2×mix可供選擇，Cat.10138）。
產品應用
多重PCR文庫構建。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃保存。有效期2年。
注意事項
1.為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
2.值得注意的是，多重PCR建庫實驗本身具有一定的難度，通常需要進行優化，如您在使用本產品時遇到困難，可聯系我們的技術支持，我們有多重優化方案，可幫助您更好的構建實驗體系。
3.本產品僅作科研用途！
PCR反應體系（推薦冰上配制）
組分 | 體積 μL |
ddH2O | to 50 |
DNA模板 | X |
Primer mix (X μM) | X |
5×Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR) | 10 |
【注】：
1）試劑使用：使用前要充分解凍混勻。
2）引物與模板：第一輪多重PCR進行target enrichment，其中的引物和模板條件需要自行摸索。
第二輪多重PCR引物的濃度建議使用：10 μM引物 加2 μL左右。
第一輪PCR擴增程序：
循環步驟 | 溫度（℃） | 時間 | 循環數 |
預變性 | 98℃ | 3 min | 1 |
變性 | 98℃ | 20 sec | 15-45 |
退火/延伸 | 60℃ | 4-10 min | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】：
在PCR儀上設置上表中的反應程序進行多重PCR反應（設置熱蓋溫度至105℃左右）。
退火/延伸時間：100重PCR推薦4 min；1000重推薦8-10 min需要自己根據引物情況摸索。
PCR產物磁珠純化
建議在50 μL 反應體系中加45 μL磁珠（Cat:12601）進行產物純化。
第二輪PCR擴增程序：
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 98℃ | 30 sec | 1 |
變性 | 98℃ | 15 sec | 25-35（可自行優化） |
退火 | 60℃ | 30 sec | |
延伸 | 72℃ | 1 min | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】：退火溫度和時間：推薦使用60℃，也可根據需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設置為30 sec，可以在10-30 sec內調節。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。
PCR產物磁珠純化
建議在50 μL 反應體系中加45 μL磁珠（Cat:12601）進行產物純化。
HB210831
