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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100 U |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10144ES60 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
| 主要用途 | 使用含dUTP的引物進行高保真文庫擴增 |
產品介紹
產品信息
產品名稱
產品編號
規格
價格（元）
Hieff Canace® II Uracil DNA Polymerase
10144ES60
100 U
393.00
10144ES76
500 U
1993.00
產品描述Hieff Canace® II Uracil DNA Polymerase是一種基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代高保真DNA聚合酶，和Pfu DNA Polymerase相比，Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase的性能得到大幅度提升，針對復雜的模板也能快速準確的完成PCR反應。其保真性是Taq DNA Polymerase的52倍，是Pfu DNA Polymerase的6倍，且*克服了常規高保真酶無法以dUTP為原料進行聚合反應、無法使用含有dUTP的擴增引物以及無法使用含有dUTP的DNA作為擴增模板等諸多弊病。本產品配備了優化后的酶緩沖液，添加了PCR增強組分，使得該酶具有*的擴增效率和廣泛的模板適應性，非常適合復雜模板的擴增。擴增產物為平末端。
產品組分編號
組分
規格
10144ES60（100U）
10144ES76（500U）
10144-A
Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA Polymerase（1 U/μL）
100 μL
500 μL
10144-B
2×Canace® II Uracil PCR buffer(含Mg2+，dNTPs)
1 mL×3
1 mL×15
運輸和保存方法冰袋運輸。
-20℃保存。有效期一年。
產品應用使用含dUTP的引物進行高保真文庫擴增
使用含dUTP的模板進行高保真文庫擴增
使用含dUTP的dNTP進行高保真文庫擴增
注意事項1) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2) 本產品僅作科研用途！
使用方法Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase與常規高保真酶的使用方法略有不同。在使用前，請務必仔細閱讀使用說明。
1. 推薦反應體系所有操作應于冰上進行，2×Canace® II Uracil PCR buffer解凍后請充分混勻。體系配置之前請預熱PCR儀，各組分添加完成之后用移液器吸打充分混勻并短暫離心至管底，然后置于預熱的PCR儀中進行反應。所有組份使用完畢之后及時放回-20℃保存。
表1 PCR擴增反應體系組分
體積
模板或接頭連接產物
X µL
2×Canace® II Uracil PCR buffer
25 µL
正向引物 (10-25 μM）
1-2.5 µL
反向引物 (10-25 μM）
1-2.5 µL
Hieff Canace® II Uracil High-Fidelity DNA polymerase（1 U/µL）
1 µL
ddH2O
Total to 50 µL
【注】：
1）試劑使用：使用前要充分解凍混勻。
2）模板：使用純化后的高質量DNA模板可以顯著提高擴增效率和成功率；
3）dNTP：推薦dNTP使用終濃度為200 μM。試劑盒中提供的dNTP中不含dUTP，如特殊情況下需要制備含dUTP的模板，可自行額外添加dUTP至終濃度為400 μM。
4）聚合酶濃度：推薦使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之間進行優化，請勿超過2 U/50 μL。為了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物，建議將聚合酶在最后一步加到反應體系中。5）Mg2+終濃度：體系終濃度為2 mM。如有特殊需要，可向我公司咨詢，要求提供低Mg2+濃度或不含Mg2+的buffer。
2．推薦反應程序表2 PCR擴增反應程序
步驟
溫度
時間
循環數
預變性
98°C
1 min
1
變性
98°C
10 sec
1~15（根據實驗要求）
退火
60°C
30 sec
延伸
72°C
30 sec
終延伸
72°C
5 min
1
Hold
4°C
-
-
【注】：
1）預變性溫度和時間：推薦使用98℃。預變性推薦時間：質粒DNA等簡單模板為30 sec；文庫為1 min；cDNA、基因組DNA等復雜模板為3 min；高GC含量模板為5-10 min；
2）退火溫度和時間：推薦使用60℃，也可根據需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設置為20 sec，可以在10-30 sec內調節。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀；
3）延伸溫度和時間：推薦使用72℃。延伸時間根據實際需要進行調整；
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產品名稱
產品貨號
規格
價格（元）
Hieff Canace® High-Fidelity DNA polymerase
10135ES60/76/80
100/500/1000 U
626/2356/4256
Hieff Canace® II High-Fidelity DNA polymerase
10140ES60/76
100/500 U
653/2453
HB210928
