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10186ES50全血直接PCR試劑盒
參考價(jià): 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 10186ES50 產(chǎn)品型號(hào)
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地

訪問(wèn)次數(shù):496更新時(shí)間:2022-02-09 15:18:56

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
全血直接PCR試劑盒是一款可以直接對(duì)全血樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增的試劑盒,無(wú)需DNA提取或樣品處理,大大降低了污染風(fēng)險(xiǎn),縮短了檢測(cè)時(shí)間。
產(chǎn)品介紹

產(chǎn)品信息

 

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

價(jià)格(元)

Animal Blood   Direct PCR Kit (With Dye)  全血直接PCR試劑盒

10186ES50

50 T

323.00  

Animal Blood   Direct PCR Kit (With Dye)  全血直接PCR試劑盒

10186ES70

200 T

983.00  


產(chǎn)品描述
 

全血直接PCR試劑盒是一款可以直接對(duì)全血樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增的試劑盒,無(wú)需DNA提取或樣品處理,大大降低了污染風(fēng)險(xiǎn),縮短了檢測(cè)時(shí)間。

試劑盒中包含配方優(yōu)化的2× Blood Master Mix,具有很強(qiáng)抑制物耐受性,人血的模板大加入量可達(dá)45%,鼠血的可達(dá)20%,可以靈敏的擴(kuò)增血液樣本中基因組和外源目的DNA篇段。2× Blood Master Mix包含了用于PCR擴(kuò)增除模板和引物外的所有組分,擴(kuò)增產(chǎn)物末端加A,適用于Hieff Clone®快速克隆試劑盒(貨號(hào):10907ES60/10908ES60)。

該試劑盒可用于直接擴(kuò)增的血樣類型包括:新鮮血液、4℃貯存血液、冷凍血液以及儲(chǔ)存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干xue漬,且兼容所有常規(guī)抗凝劑(EDTA、檸檬酸鹽、肝素等)。適用樣本來(lái)源包括人血、鼠血、雞血、鳥(niǎo)血、牛血、狗血等。


產(chǎn)品組分
 

編號(hào)

組分

產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格

10186ES50(50T)

10186ES70(200T)

10186-A

2× Blood Master Mixa

500 µL

1 mL× 2

a)2× Blood Master Mix:包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl2、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等,產(chǎn)品已混合溴酚藍(lán)染料(不含SDS),PCR產(chǎn)物可以直接進(jìn)行電泳。


運(yùn)輸和保存方法
 

冰袋運(yùn)輸。-20℃保存。避免反復(fù)凍融。


操作方法
 

1. PCR反應(yīng)體系配制
 

組分

體積(μL)

體積(μL)

終濃度

2× Blood Master Mix

10

25

Forward Primer (10 μM)

0.5

1

0.2 μM

Reverse Primer (10 μM)

0.5

1

0.2 μM

抗凝全血

X

X

-

ddH2O

To 20

To 50

-

【注】:使用前務(wù)必充分混勻,避免劇烈震蕩產(chǎn)生過(guò)多氣泡。
 a)模板使用量:進(jìn)行基因組上的目的片段檢測(cè),建議使用少量的血液量作為模板;檢測(cè)血液樣本中某種病毒或細(xì)菌等的目的片段,建議擴(kuò)大PCR體系并使用較大量的血液模板。血液模板多占PCR體系的45%(人血)、20%(鼠血)。若模板使用含有血液的采集卡,可截取直徑1-4 mm的血點(diǎn),直接加入20-50 μL PCR反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增。

b)引物濃度:通常引物終濃度為0.2 μM,也可以根據(jù)情況在0.1-0.5 μM之間進(jìn)行調(diào)整。

c)反應(yīng)體系:推薦使用20 μL或 50 μL,以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。

d)體系配制:配制好PCR反應(yīng)體系,置于渦旋儀上渦旋混勻,瞬時(shí)離心將反應(yīng)液集于管底。

 

2. PCR反應(yīng)條件設(shè)置
 

循環(huán)步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

95℃

5 min

1

變性

95℃

10 sec

30-40

退火

50℃~65℃

20 sec

延伸

72℃

30 sec/kb

終延伸

72℃

5 min

1

【注】: a)預(yù)變性:95℃,5 min可以讓白細(xì)胞裂解,釋放可用于PCR擴(kuò)增的基因組DNA。請(qǐng)勿縮短時(shí)間或降低溫度。

b)退火溫度:退火溫度設(shè)置為引物Tm值即可。然而,使用高的退火溫度可以有效減少非特異性擴(kuò)增,并提高全血模板的擴(kuò)增效率。因此,如擴(kuò)增產(chǎn)物特異性較差,可以建立一個(gè)溫度梯度反應(yīng)去尋找引物模板適退火溫度。

c)延伸時(shí)間:按30 sec/kb設(shè)定,如不足30 sec,設(shè)置30 sec即可。

d)擴(kuò)增循環(huán)數(shù):35個(gè)循環(huán)已可以擴(kuò)增足量產(chǎn)物。太多的循環(huán)將會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增增加。


3. 擴(kuò)增產(chǎn)物分析
 

PCR完成后,建議將反應(yīng)液于1000× g (大約4000 rpm) 離心1~3 min以沉淀血細(xì)胞碎片,之后取上清進(jìn)行下游分析。該步驟可有效去除多種血液組分。當(dāng)使用高濃度血液模板時(shí)此步尤為重要,因?yàn)榻?jīng)過(guò)PCR循環(huán),反應(yīng)管中會(huì)存在大量的血細(xì)胞碎片。這些碎片會(huì)干擾下游的檢測(cè),如瓊脂糖電泳檢測(cè)。注意:由于血液本身的原因,PCR 結(jié)束后在 PCR 管的底部會(huì)出現(xiàn)透明凝膠狀物質(zhì),此為正常現(xiàn)象。


4. 對(duì)照反應(yīng)
 

在PCR結(jié)果分析時(shí),不管是陽(yáng)性結(jié)果或陰性結(jié)果,如果沒(méi)有對(duì)照反應(yīng),都不能確定結(jié)果是否可靠。為了便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析,建議在進(jìn)行PCR時(shí),設(shè)置陽(yáng)性和陰性PCR對(duì)照反應(yīng)以便于排除假陽(yáng)性或假陰性的干擾。

4.1 陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)體系
 

組分

體積(μL)

體積(μL)

終濃度

2× Blood Master Mix

10

25

Forward Primer (10 μM)

0.5

1

0.2 μM

Reverse Primer (10 μM)

0.5

1

0.2 μM

模板DNA

X

X

100-200 ng

ddH2O

To 20

To 50

-

【注】:a)模板DNA:選用樣本純化的DNA。

 b)引物的選擇:建議選擇該樣本較易擴(kuò)增的基因的引物,如 β-actin 基因或 GAPDH 等。


4.2 陰性對(duì)照
 

PCR反應(yīng)體系被污染會(huì)導(dǎo)致PCR結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性,需要設(shè)置陰性對(duì)照來(lái)排除。將使用的移液器槍頭浸泡在2× Blood Master Mix中,添加引物,ddH2O進(jìn)行PCR擴(kuò)增;另取ddH2O作為模板,用目的基因引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,以排除PCR體系是否被污染和實(shí)驗(yàn)是否有其他污染源。


注意事項(xiàng)
 

1. 盡量使用新鮮抗凝血。若凍存血,應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 解凍后2× Blood Master Mix可能出現(xiàn)渾濁,冰上放置1-2 min,待溶液澄清后,上下顛倒混勻,不影響試劑性能。
3. 建議擴(kuò)增片段長(zhǎng)度1 kb以內(nèi),以便擴(kuò)增效率*。

4. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

常見(jiàn)問(wèn)題與解決方法
 

常見(jiàn)問(wèn)題

可能原因

解決方法

陽(yáng)性對(duì)照、待測(cè)樣本均無(wú)條帶。

PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適。

使用梯度PCR摸索PCR*反應(yīng)條件。

PCR試劑保存不當(dāng)失去活性。

2× PCR Mix應(yīng)保存于-20℃,使用時(shí)避免反復(fù)凍融。若使用頻繁,可在4℃短時(shí)間存放。

引物設(shè)計(jì)問(wèn)題。

嘗試重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查。

陽(yáng)性對(duì)照有目的條帶,待測(cè)樣本無(wú)條帶或條帶弱。

血液樣本保存不當(dāng),基因組DNA降解。

抗凝全血可在4℃保存2-8天,需長(zhǎng)時(shí)間保存可將樣本置于在-20℃或-70℃凍存,并避免反復(fù)凍融。

模板加入量不適合。

可在PCR體系10%-30%范圍內(nèi)優(yōu)化血液加入量;若是擴(kuò)增血液樣本中的病毒或細(xì)菌DNA篇段,可將模板量增加至30%-40%。

PCR循環(huán)數(shù)不足。

適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù),推薦在35-40循環(huán)為佳。因?yàn)槟0鍙?fù)雜,一般PCR反應(yīng)要比用純化的   DNA模板多5-10個(gè)循環(huán)為佳。

非特異性擴(kuò)增

PCR退火溫度太低,循環(huán)數(shù)、引物濃度或模板濃度太高。

增加PCR退火溫度,降低PCR循環(huán)數(shù)、引物濃度或模板濃度。

PCR引物錯(cuò)配。

重新設(shè)計(jì)PCR引物。

配制PCR反應(yīng)體系時(shí)溫度太高或配制完成后放置時(shí)間太久。

PCR反應(yīng)體系的配制在低溫下進(jìn)行,配制完成后盡快進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

陰性對(duì)照出現(xiàn)目的條帶

操作工具或試劑污染。

實(shí)驗(yàn)所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時(shí)應(yīng)小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。


相關(guān)產(chǎn)品
 

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

價(jià)格(元)

Animal Tissue Direct PCR Kit 動(dòng)物組織直接PCR試劑盒

10180ES50/70

50/200 T

383/1353

Mouse Tissue Direct PCR Kit 小鼠組織直接PCR試劑盒HOT

10181ES50/70

50/200 T

293/883

Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒

10182ES50/70

50/200 T

293/883

Plant Tissue PCR Kit 植物組織直接PCR試劑盒HOT

10183ES50/70

50/200 T

353/1213

Animal Tissue Direct PCR Kit  (With Dye) 動(dòng)物組織直接PCR試劑盒

10184ES50/70

50/200 T

433/1453

Mouse Tissue Direct PCR Kit  (With Dye) 小鼠組織直接PCR試劑盒

10185ES50/70

50/200 T

323/983

Plant Tissue PCR Kit  (With Dye) 植物組織直接PCR試劑盒

10187ES50/70

50/200 T

393/1353

HB190220



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