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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
|---|
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML MBP標簽蛋白純化預裝柱，1 ML | 20516ES03 | 1 mL | 4℃ | 358.00 |
20516ES08 | 5×1 mL | 4℃ | 1258.00 |
產品描述
MBPSep Dextrin Agarose Resin是一種純化帶有麥芽糖結合蛋白（MBP）標簽蛋白的親和層析介質，MBP可促進連接蛋白的正確折疊，增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步純化MBP融合蛋白，結合的融合蛋白可以用10 mM麥芽糖進行溫和洗脫，保護了目的蛋白的活性，MBP融合部分后續可用位點特異性蛋白酶切除。
此外，MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF以高度交聯的6%瓊脂糖凝膠為基質，具有更高的物理化學特性，可以耐受更高的壓力，在相對較高的流速下，實現對目的蛋白的純化，更適于工業大規模蛋白的純化。
MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML是裝填了MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF的一種中壓預裝柱，規格1 mL，預裝柱具有標準接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統，如ÄKTA等，方便客戶操作。
產品性質
基質（Matrix） | 高度交聯的6%瓊脂糖微球 |
配體（Ligand） | 糊精 |
粒徑（Bead size） | 45-165 µm |
載量（Capacity） | ＞10 mg MBP蛋白（80 kDa） |
大壓力（PressureMax） | 0.3 MPa, 3 bar |
pH穩定范圍（pH range） | 3-12 |
儲存緩沖液（Buffer） | 20%乙醇 |
運輸和保存方法
冰袋運輸。4℃保存，有效期2年。
需準備試劑
所用水和Buffer在使用前*用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾除菌。
結合/洗雜緩沖液：20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 7.4
洗脫緩沖液：20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA，10 mM 麥芽糖, pH 7.4
注：結合/洗雜緩沖液或者洗脫緩沖液中可加入1 mM DTT或10 mM β-巰基乙醇。
使用方法
注：樣品在上樣前*用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質以防阻塞柱子。
1樣品純化（以Akta為例）
1）準備：將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統中。再折斷下口，將預裝柱接到色譜系統中，并旋緊。
2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲存液。
3）平衡：用5倍柱體積的結合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。
4）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，推薦流速1 mL/min，保證目的蛋白與樹脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測。
注：樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會導致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進樣器更難使用。
5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進行清洗，直到紫外吸收達到一個穩定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液，待檢測。
6）洗脫：用洗脫Buffer采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液足夠將目的蛋白洗脫下來。也可以用一個小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來分離不同結合強度的蛋白質。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的結合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被細菌污染。
2 SDS-PAGE檢測
將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進行檢測，判定其純化效果。
3 填料清洗
隨著非特異結合蛋白的增多和蛋白的聚集，會造成流速和結合載量性能下降，此時需對填料進行清洗。
1）3倍柱體積的去離子水；
2）3倍柱體積的0.1%SDS或0.5 M NaOH溶液；
3）3倍柱體積去離子水；
4）3倍柱體積20%乙醇，保存于4℃。
注意事項
附表 問題及解決方案
問題 | 可能原因 | 推薦解決方案 |
柱子反壓過高 | 填料被堵塞 | 清洗樹脂。 |
裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上樣前*用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，或離心去除。 | ||
洗脫組分中無目的蛋白 | 目的蛋白未表達 | 優化實驗方案，確保目的蛋白表達 |
樣品或緩沖液中存在一些干擾因素如非離子去污劑 | 樣品透析或用結合buffer稀釋 | |
細胞產生大量的淀粉酶影響結合力 | 培養基中添加葡萄糖，抑制淀粉酶的表達 | |
融合蛋白使麥芽糖結合位點阻塞或扭曲影響了目的蛋白的結合力 | 更換載體 | |
柱子結合時間太短 | 將樣品與樹脂振蕩孵育4℃ 2 h或更長時間 | |
洗脫樣品較雜 | 目的蛋白降解 | 加一些蛋白酶抑制劑，如PMSF、EDTA等 |
平衡/洗雜不充分 | 增加平衡液體積，確保樹脂充分平衡/洗雜。 |
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