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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 40000 U |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10299ES40 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
| 主要用途 | NGS建庫 |
產品介紹
Hieff® Fast T4 DNA Ligase (400 U/µL)
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hieff® Fast T4 DNA Ligase (400 U/µL) | 10299ES40 | 40000 U | 983.00 |
產品描述
Hieff® Fast T4 DNA Ligase是一款可用于NGS建庫過程中DNA///片段和接頭連接的單酶產品，該產品已經過高通量測序驗證，質量優異。本酶具有高效的連接能力，非常適合復雜結構核酸片段的連接，比如華大平臺的Ω接頭。對于無需進行體系調整的客戶，推薦選購Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module (Cat#12604)，其核心組分即為本品。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 規格 |
10299-A | Hieff® Fast T4 DNA Ligase (400 U/µL) | 100 µL |
10299-B | 10 × T4 DNA Ligase Buffer | 250 μL |
運輸和保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期2年。
單位定義
在20 μL的連接反應體系中，6 μg的λDNA-Hind Ⅲ分解物在16℃下反應30 min時，催化50%以上的DNA///片段發生連接所需要的酶量定義為1個活性單位(U)。
質量控制
核酸外切酶殘留檢測：2000 U的本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在37℃下反應4小時，DNA的電泳譜帶不發生變化。
核酸內切酶殘留檢測：2000 U的本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37℃下反應4小時，DNA電泳譜帶不發生變化。
注意事項
1）Buffer在融解時，如果出現少量沉淀屬正常現象，請顛倒混勻后使用。
2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 目前主流的合并法DNA建庫試劑盒，其末端修復和加A處理后一般不純化，直接進行接頭連接。本試劑盒可與主流的商業化末端修復加A體系兼容，進行接頭連接。反應體系請參考如下配制，渦旋瞬離后置于20℃，反應15 min即可。
表1 Adapter Ligation體系
名稱 | 體積（μL） |
dA-tailed DNA | 60 |
10 × T4 DNA Ligase Buffer | 10 |
50% PEG 6000 | 10* |
DNA Adapter | X** |
Hieff® Fast T4 DNA Ligase | 1-5*** |
ddH2O | To 100 |
【注】：*試劑盒內未提供50% PEG 6000，需自行準備。
**接頭用量參考表2。
***Hieff® Fast T4 DNA Ligase用量可根據需要添加1-5 μL。
2. Adapter的質量和使用濃度直接影響連接效率及文庫產量。Adapter用量過高可能會產生較多Adapter Dimer；用量較低可能會影響連接效率及文庫產量。表2列舉了使用本試劑盒，不同Input DNA量推薦的Adapter使用量。
表2 500 pg-1 μg Input DNA推薦的Adapter使用濃度
Input DNA | Adapter : Input DNA摩爾比 | Input DNA | Adapter : Input DNA摩爾比 |
1 μg | 10:1 | 50 ng | 100:1 |
500 ng | 20:1 | 25 ng | 200:1 |
250 ng | 40:1 | 1 ng | 200:1 |
100 ng | 100:1 | 500 pg | 400:1 |
【注】：Input DNA摩爾數（pmol）≈ Input DNA質量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]。
【接頭添加計算舉例】：當Input DNA為100 ng，Input DNA長度為300 bp時，接頭應該添加多少？
第—步，計算Input DNA摩爾數。公式：Input DNA摩爾數（pmol）≈ Input DNA質量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]；
Input DNA摩爾數（pmol）=100 ÷（0.66×300）=0.5 pmol；
第二步，計算接頭添加摩爾數。根據表2查詢接頭添加比例；
根據表2，查得Input DNA 100ng時接頭添加比例100:1，則接頭添加摩爾數=100×0.5 pmol=50 pmol；
第三步，計算接頭添加體積。接頭濃度=15 μmol/L（如使用其他接頭，濃度需要依據其他接頭濃度參數）；
接頭添加體積=接頭添加摩爾數（50 pmol）÷接頭濃度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）
綜上，接頭可添加3.4 μL。（注：接頭大加入體積不超過5 μL）相關產品
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 價格（元） |
Hieff NGS® Ultima FR DNA Library Prep Kit for Illumina | 12199ES08/24/96 | 8/24/96 T | 2553/6783/25563 |
Hieff NGS® Ultima Endprep Mix | 12605ES24/96 | 24/96 T | 4233/14333 |
Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module | 12604ES24/96 | 24/96 T | 3263/10863 |
Hieff NGS® FFPE DNA Repair Reagent | 12606ES24/96 | 24/96 T | 2253/7633 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 1 | 12615ES04/16 | 12×4/12×16 T | 1256/4536 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 2 | 12616ES04/16 | 12×4/12×16 T | 1256/4536 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 3 | 12617ES04/16 | 12×4/12×16 T | 1256/4536 |
Hieff NGS® Complete Adapter Kit for Illumina®, Set 4 | 12618ES04/16 | 12×4/12×16 T | 1256/4536 |
2×Super Canace® Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification | 12621ES24/96 | 24/96 T | 583/1783 |
Hieff NGS® DNA selection Beads（Superior Ampure XP alternative） | 12601ES08/56 | 5/60 mL | 986/6286 |
dsDNA HS assay kit for Qubit® | 12640ES60/76 | 100/500 T | 686/2696 |
HB200710
