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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 24T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 12606ES24 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
| 主要用途 | NGS |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hieff NGS® FFPE DNA Repair Reagent 石蠟包埋DNA樣本修復試劑 | 12606ES24 | 24 T | 2253.00 |
12606ES96 | 96 T | 7633.00 |
產品描述
Hieff NGS® FFPE DNA Repair Reagent石蠟包埋DNA樣本修復試劑是針對FFPE樣本而設計的修復試劑，可修復低質量FFPE樣本不同程度的損傷，提高文庫產量及測序質量。本產品可直接用于翊圣生物Hieff NGS® UltimaTM DNA Library Prep Kit for Illumina®（Cat#12199），體系兼容，無需額外的操作步驟，可修復5 ng - 1 μg Fragmented FFPE DNA。如配合其他品牌建庫試劑，可修復純化之后再行建庫。此外，本產品也可直接用于翊圣生物片段化酶法建庫試劑盒Hieff NGS® OnePotTM II DNA Library Prep Kit for Illumina®（Cat#12204）。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 24 T | 96 T |
12606-A | FFPE DNA Repair Mix | 120 μL | 480 μL |
12606-B | FFPE DNA Repair Buffer | 144 μL | 576 μL |
運輸與保存方法
冰袋運輸。
-20℃保存，有效期1年。
注意事項
1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 請于使用前將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后上下顛倒數次充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。
3. 配制各步驟反應液時推薦使用移液器吹打混勻或輕輕振蕩，劇烈振蕩可能會造成文庫產出下降。
4. 為避免樣品交叉污染，推薦使用帶濾芯的槍頭，吸取不同樣品時請更換槍頭。
5. 推薦在帶熱蓋的PCR儀中進行各步驟反應，使用前應預熱PCR儀至反應溫度附近。
6. 注意PCR產物若操作不當極容易產生氣溶膠污染，進而影響實驗結果準確性。推薦將PCR反應體系配制區和PCR產物純化檢測區進行強制性的物理隔離；使用的移液器等設備；并定時對各實驗區域進行清潔（使用0.5%次氯酸鈉或10%漂白劑進行擦拭清理），以保證實驗環境的潔凈度。
使用方法
一、與Hieff NGS® UltimaTM DNA Library Prep Kit for Illumina®（Cat#12199）組合使用
1. 將表1中試劑解凍后，顛倒混勻，置于冰上備用。
2. 于冰上（4℃）配制表1所示反應體系。
表1 末端修復/dA尾添加PCR反應體系
名稱 | 體積（μL） |
Fragmented FFPE DNA | x |
Endprep Mix | 10 |
FFPE DNA Repair Mix | 5 |
ddH2O | Up to 60 μL |
3. 使用移液器輕輕吹打或輕柔振蕩混勻，并短暫離心將反應液離心至管底。
4. 將上述PCR管置于PCR儀，設置表2所示反應程序，進行末端修復/dA尾添加反應。
表2 末端修復/dA尾添加PCR反應程序
溫度 | 時間 |
熱蓋105°C | On |
20°C * | 15 min* |
72°C | 20 min |
4°C | Hold |
【注】：配合Cat#12199試劑盒使用時，為了蕞佳的修復效果，末修程序的溫度時間稍作調整，參考此說明書進行即可。
5. 產物可直接按照建庫試劑盒說明書進行接頭連接及后續操作。
二、與Hieff NGS® OnePotTM II DNA Library Prep Kit for Illumina®（Cat#12204）組合使用
1. 將表3中各試劑解凍后，顛倒混勻，置于冰上備用。
2. 于冰上配制表3反應體系。
表3 DNA///片段化/末端修復/dA尾添加 PCR反應體系
名稱 | 體積（μL） |
Input DNA | x |
Smearase® Mix | 10 |
FFPE DNA Repair Mix | 5 |
ddH2O | Up to 60 μL |
3. 使用移液器輕輕吹打或低速振蕩混勻，并短暫離心將反應液離心至管底。
4. 將上述PCR管置于PCR儀，設置表4所示反應程序，進行DNA///片段化，末端修復及dA尾添加反應。
表4 DNA///片段化/末端修復/dA尾添加 PCR反應程序
溫度 | 時間 |
熱蓋105°C | On |
4 °C | 1 min* |
30 °C | 3-20 min** |
72 °C | 20 min |
4 °C | Hold |
【注】：*DNA///片段化過程為有效控制片段化效果，避免過度酶切，反應程序可預先設置4°C，待模塊溫度降至4°C時，將PCR管放入PCR儀即可。
**對于質量不一的FFPE DNA樣本，酶切時間參考表5。
表5 FFPE DNA///片段化時間選擇表
插入片段主峰大小 | 片段化時間 | DIN* |
250 bp | 9-13 min | > 8.0 |
250 bp | 8-11 min | 6.5-8.0 |
250 bp | 4-8 min | 4.2-6.5 |
250 bp | 3-6 min | 2.5-4.2 |
【注】：*DIN為DNA Integrity Number，是用Agilent 2200來定義FFPE DNA降解程度的一種方法，詳見圖1。
三、與其他試劑盒配合使用（修復純化之后再行建庫）
1. 將表6中試劑解凍后，顛倒混勻，置于冰上備用。
2. 于冰上（4℃）配制表6所示反應體系。
表6 FFPE DNA Repair反應體系
名稱 | 體積（μL） |
Fragmented FFPE DNA | x |
FFPE DNA Repair Buffer | 6 |
FFPE DNA Repair Mix | 5 |
ddH2O | Up to 60 μL |
3. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應液離心至管底。
4. 將上述PCR管置于PCR儀，設置表7所示反應程序，進行FFPE DNA Repair反應。
表7 FFPE DNA Repair反應程序
溫度 | 時間 |
熱蓋105°C | On |
20°C | 15 min |
4°C | Hold |
6. 修復產物立即加入108 μL（1.8 ×）磁珠（Hieff NGS® DNA Selection Beads，Cat#12601或AMPure XP Beads，Cat#A63880或其他等效產品）進行純化回收。
7. 純化產物按試劑盒操作說明進行建庫。
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