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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 10730ES01 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
Hieff UNICON HotStart Taq DNA Polymerase, 50 U/μL
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, 50 U/μL | 10730ES01 | 100 μL | 5152.00 |
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, 50 U/μL | 10730ES03 | 1 mL | 詢價 |
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, 50 U/μL | 10730ES25 | 25 mL | 詢價 |
產品描述
Hieff UNICON HotStart Taq DNA Polymerase是Hieff UNICON® Taq抗體（貨號：30301ES）和Hieff® Taq DNA Polymerase（貨號：10101ES）的混合產品。Hieff UNICON® Taq抗體與Hieff® Taq DNA Polymerase具有很高的親和力，高溫50℃處理30 min，依舊可以封閉Hieff® Taq DNA Polymerase的活性。本品在預變性溫度下加熱30 sec*失活，釋放出DNA聚合酶活性。使用該熱啟動Taq酶可以有效抑制引物非特異性退火導致的擴增。
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase適用于熱啟動PCR和qPCR。本品中的Hieff® Taq DNA Polymerase是熱穩定重組型DNA聚合酶，具有較高的模板親和力，非常適合低拷貝模板的擴增。擴增產物具有3′-dA，可輕松克隆T載體。
產品組分
編號 | 組分 | 10730ES01 (100 μL) | 10730ES03 (1 mL) | 10730ES25 (25 mL) |
10730-A | HotStart Taq DNA Polymerase (50 U/μL) | 100 μL | 1 mL | 25 mL |
產品應用
低拷貝基因擴增、基因型鑒定
活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，74℃，30 min內，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位（U）。
質量控制
DNA聚合酶活性封閉性檢測：在Hieff UNICON® HotStart Taq Buffer (Mg2+ Plus)中，65℃孵育30 min，活性釋放低于5%。
DNA聚合酶活性釋放檢測：在Hieff UNICON® HotStart Taq Buffer (Mg2+ Plus)中，95℃加熱30 sec，活性釋放高于95%。
核酸外切酶殘留檢測：20 μL反應體系，10 U本品和0.6 μg λ-HindIII，74℃孵育1 h，DNA的電泳譜帶無變化。
核酸內切酶殘留檢測：20 μL反應體系，10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA，74℃孵育1h，DNA電泳譜帶無變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測：50 μL體系中，加入2 U本品，以無菌ddH2O為模板，擴增E.coil 16s rDNA基因。35個循環后擴增產物進行1%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無擴增條帶。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃保存，有效期2年。
PCR反應體系（50 μL）
組分 | 體積 (μL) | 終濃度 |
ddH2O | to 50 | - |
2×Taq Buffer（含Mg2+、dNTP） | 25 | 1× |
模板DNA | 適量 | - |
Primer正向 (10 μM) | 2 | 0.4 μM |
Primer反向 (10 μM) | 2 | 0.4 μM |
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase (50 U/μL) | 0.05 | 2.5 U/50 μL |
【注】：1）試劑使用：各組分使用前需充分融化混勻。
2）聚合酶濃度：推薦使用2.5 U/50 μL。可以在1.25-5 U/50 μL之間進行優化。
3）Mg2+終濃度：體系終濃度為2 mM。如有特殊需要，可用25 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。
4）不同模板的推薦使用量（50 μL反應體系）：
模板種類 | 模板使用量 |
基因組DNA | 50 ng-200 ng |
質粒DNA | 100 pg-20 ng |
cDNA | 1-5 μL (不超過反應體系的1/10) |
PCR擴增程序
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 95℃ | 1 min | 1 |
變性 | 95℃ | 10 sec | 35-40 |
退火 | 60℃ | 20 sec | |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
終延伸 | 72℃ | 10 min | 1 |
【注】：1）退火溫度和時間：溫度推薦使用50-60℃。退火溫度過低會導致非特異性擴增。引物設計參考熒光定量引物標準。推薦退火時間設置為20 sec，可以在10-30 sec內調節。
2）延伸溫度和時間：溫度推薦使用72℃。時間推薦使用30 sec/kb。
3）擴增產物：請將PCR擴增產物放置于-20℃保存，防止DNA發生降解。
4）擴增程序：本產品用于定量實驗，可使用2步法程序擴增，去掉延伸步驟，退火和延伸合為一步，對應的時間常用30 sec或根據儀器型號設置，如Applied Biosystems 7300需用31 sec以上。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
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HB200522
