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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1000U |
---|---|---|---|
貨號 | 10321ES80 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格(元) |
Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP) 小牛腸堿性磷酸酶 | 10321ES80 | 1000U | 936.00 |
產品描述
Alkaline Phosphatase,中文名堿性磷酸酶,可將DNA、RNA的5’端磷酸基團去除,常用于阻止載體的自連作用:在分子克隆實驗中,DNA連接酶催化DNA連接時需要有磷酸基團的存在,載體在經酶切后會在切點端保留一個磷酸基團。而載體經堿性磷酸酶去磷酸化后因5’端無磷酸基團,因而不可以和自身3’端連接。因此連接反應中載體本身會優先發生的連接反應被阻止,提高了目的片段插入率。另外,堿性磷酸酶還可制備用于5’端標記的DNA模板,以及用于該酶蛋白的脫磷酸作用等。
本品為小牛腸來源的堿性磷酸酶,可以降解幾乎所有磷酸單酯,但是該酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產品編號/規格 |
10321ES80(1000 U) | ||
10321-A | Alkaline Phosphatase (30 U/μL) | 1000 U |
10321-B | 10×AP buffer | 1 mL |
產品性質
來源(Source) | 攜帶小牛腸堿性磷酸酶表達質粒的酵母 |
質量控制(Quality Control) | 無核酸外切酶、核酸內切酶、核糖核酸酶污染 |
熱滅活(Thermal Inactivation) | 在螯合劑存在下,65℃加熱30 min,99%活性不可逆喪失;使用苯酚,可使酶*失活。 |
儲存液條件(Storage conditions) | 10 mM Tris-HCl(pH8.0),1 mM MgCl2,50 mM KCl,0.1 mM ZnCl2,50% glycerol. |
活性定義(Unit definition) | 在pH9.8,37℃條件下,以對硝基苯酚磷酸鹽(p-nitrophenylphosphate)為底物,1分鐘生成1 µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的堿性磷酸酶量定義為1個活力單位。 |
最佳pH(Optimal pH) | 該酶在底物濃度高的情況下其最佳反應pH為10,在底物濃度低時,最佳pH為8,此時該酶活性較高濃度底物時稍低。 |
優化體系(Optimal Buffer) | AP Buffer(500 mM Tris-HCl pH9.0,10 mM MgCl2) |
運輸和保存方法
干冰運輸。-20℃保存,有效期18個月。
注意事項
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1 DNA去磷酸化
① 在1.5 mL離心管中加入下列試劑:
組分 | 體積 |
無菌ddH2O | Up to 50 µL |
DNA 片段* | 1-20 pmol |
Alkaline Phosphatase | 1-2 µL |
10×AP buffer | 5 µL |
【*】單鏈DNA或含5’端突出末端的DNA推薦低溫下孵育,平末端DNA或含3’突出末端的DNA建議在較高溫度下孵育。
② 混勻上述試劑,于37℃或50℃孵育30 min。或者37℃孵育15 min后,再于50℃孵育15 min。
2 酚氯仿法抽提DNA
① 苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)抽提2次。
【注】推薦在酚提取前將其在含5 mM EDTA,0.5% SDS,50 μg/mL Proteinase K的溶液中56℃孵育30 min以*滅活堿性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10 min,滅活效果更佳。
② 氯仿/異戊醇(24:1)抽提。
3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5 µL 3 M NaCl(終濃度150 mM)。
② 加入125 µL(2.5倍體積)預冷乙醇,混勻后于-20℃放置30-60 min,沉淀DNA。
4 溶解DNA
離心,*去除乙醇后,將DNA溶于適量去離子水(<20 µL)。
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HB210723